化学结构与性质
sulfo-Cyanine5 dUTP是由脱氧尿苷三磷酸(dUTP)和带有sulfo-Cyanine5荧光染料的共价连接体组成。其核心结构包含:
dUTP部分:为DNA合成所必需的核苷酸之一,可被DNA聚合酶识别并掺入DNA链中,取代普通的dTTP。
sulfo-Cyanine5染料:一种水溶性、带负电荷的荧光染料,发射波长约为670 nm,属于红色荧光范围。sulfo基团的存在显著提升了染料的水溶性,减少了非特异性结合和染料聚集,适合在生物体系中使用。
连接基团:通常染料通过化学键(如通过核苷酸的碱基或糖部分)与dUTP连接,使染料能稳定地掺入DNA中。
功能和用途
sulfo-Cyanine5 dUTP的主要功能是作为荧光标记核苷酸,在DNA合成过程中被掺入新合成的DNA链,从而实现DNA分子的直接荧光标记。这一特性使其在分子生物学研究中发挥重要作用,具体应用包括:
DNA标记与扩增检测
在PCR或其他核酸扩增技术中掺入sulfo-Cyanine5 dUTP,可在扩增的DNA分子中直接引入荧光标记,方便实时检测和后续分析。无需额外的标记步骤,简化操作流程。
荧光原位杂交(FISH)和细胞成像
利用sulfo-Cyanine5 dUTP标记的探针,可以精准定位细胞或组织中的特定DNA序列。由于该染料发射红色荧光,能与其他颜色的染料多重标记配合使用,实现多重靶标检测。
基因组学与分子诊断
适用于微阵列、染色体分析、突变检测等技术中,为基因研究和临床诊断提供高灵敏度的标记手段。
单分子荧光检测和活细胞成像
由于其较高的光稳定性和较强的荧光强度,sulfo-Cyanine5 dUTP适合在单分子水平进行检测及在活细胞环境中进行成像。
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