文献：Extracellular Vesicle Crosslinkers Constructing Hydrogels with Stress-Relaxation and Bioactive Protein Modification

作者：Shi, Yanzhen Jing, Haowen Lu, Fanxuan Zhao, Mengying An, Shuiling Jin, Chang Gao, Yongdong Dai, Yinxin Zhu, Shuxu Yang, Songying Zhang, Xuesong Ye, Xiujun Cai, Yifan Wang

文献链接：https://advanced.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/admi.202400885

DSPE-PEG-BSA的制备与表征

将10 mg DSPE-PEG-NHS（分子量6002.637）和100µg BSA溶解在2 mL PBS（10 mM，pH 7.4）中，并在4°C下孵育过夜。使用截留分子量为10kDa的Amicon离心过滤器以4500g用PBS洗涤所得溶液三次，每次洗涤10分钟，得到DSPE-PEG-BSA。

PEG-DSPE-BSA的结合通过使用4-20%聚丙烯酰胺预铸Tris-甘氨酸凝胶对BSA和PEG-DSPE-B进行SDS-PAGE分析得到证实，然后进行考马斯亮蓝染色（P0017A，Beyotime），2小时后脱色，并使用Bio-Rad凝胶成像仪成像。

将10 mg DSPE-PEG-NHS和100µg重组GFP（G7951，Solarbio）溶解在2 mL PBS中，并在4°C下孵育过夜。使用截留分子量为10kDa的Amicon离心过滤器以4500g用PBS洗涤混合物三次，每次洗涤10分钟，以获得DSPE-PEG-GFP。

然后将该溶液（100µL）与8mg DSPE-PEG-SH一起加入EV溶液（100μL）中，然后在37°C下孵育30分钟，以获得SH-EV-GFP。将所得溶液与5%PEG-Nb、CGRGDS（1 mM）和LAP（6 mM）混合，并在紫外光（15 mW cm-2，30 s）下交联以诱导凝胶化。在洗掉未反应的DSPE-PEG-GFP后，使用共聚焦显微镜确认蛋白质的成功结合。

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