文献:使用分子定义的成像剂对*性*PD-L1*体定位进行多尺度成像
链接:https://link.springer.com/article/10.1186/s12951-022-01272-5
作者:艾里斯·M·哈格曼斯,彼得·J·维尔斯特拉卡斯·施图滕Janneke DM 莫尔肯波尔-库南,杜科·范·达伦马丁·特尔·比斯特约翰·MS ·范德舒特奥尔加·伊琳娜马丁·戈特哈特卡尔·G·菲格多尔费伦茨·A·舍伦,桑德拉·赫斯坎普马丁·维尔多斯
节选:
FabPD-L1-IH18 的聚乙二醇化和纯化
将 10 Eq. (94.0 nmol) 的 mPEG-DBCO (Click Chemistry Agents, A120) 的 PBS (3.33 mM) 溶液直接添加到 Fab PD-L1-IH18 的 PBS 溶液 (470 µg, 9.40 nmol, 3.0 mg/mL) 中,使 Fab PD-L1-IH18 与 20 kDa PEG 偶联。将该混合物在 37 °C 下孵育 90 分钟,使用 Amicon Ultra-4 离心过滤装置 (MWCO 10 kDa (Merck, UFC801024)) 与 0.02 M 醋酸盐缓冲液 (pH 4.5,缓冲液 A) 进行缓冲液交换,随后使用 1 mL HiTrap SP FF (GE Lifesciences, 17505401) 阳离子交换柱在 NGC Quest Plus Bio-Rad 系统上以 0.5 mL/min 的操作速度进行纯化。用缓冲液 A 平衡 8 个柱体积后,加入缓冲液 A 中 0.5 M NaCl 的线性梯度(30 个柱体积中 0-0.5 M NaCl)。聚乙二醇化 Fab PD-L1-IH18 通常在约 8 个柱体积(0.15 M NaCl)后洗脱。使用 Amicon Ultra-4 离心 10 kDa MWCO 过滤装置(Merck,UFC 801024)和无菌 PBS 作为缓冲液浓缩含有纯化产物的级分,并通过 12% SDS-PAGE 进行分析。使用 Nanodrop 测定浓度。通过使用 BCA 分析(Pierce BCA 蛋白质测定试剂盒,ThermoFisher Scientific)验证该方法的可靠性。如上所述,通过进行密度测定法来量化蛋白质纯度。纯度 Fab PD-L1-IH18-PEG 20kDa = 89%。
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