文献:脂质膜上的微粒组装途径
链接:https://www.cell.com/biophysj/fulltext/S0006-3495(17)30844-5
作者:卡斯珀·范德韦尔1 ∙ 多丽丝·海因里希1,2 ∙ 丹妮拉·J·克拉夫特1
节选:
膜制备
采用标准电膨胀技术(14)制备了直径在5至20微米之间的巨型单层囊泡(GUVs)。在氯仿中配制了2克/升的脂质混合物,其中包含97.5重量%的二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、2.0重量%的聚乙二醇-聚氧乙烯醚-生物素(DOPE-PEG-biotin)和0.5重量%的聚乙二醇-罗丹明(DOPE-rhodamine)。接下来,在两个6平方厘米的氧化铟锡涂层载玻片(15–25 μm,Sigma-Aldrich)上各干燥10微升该溶液,随后浸入含有100毫摩尔葡萄糖和0.3毫摩尔叠氮化钠的49:51重水:水溶液中。为诱导囊泡形成,电*在10赫兹下施加1.1伏(均方根值)电压2小时。由此获得的囊泡在室温下储存在牛血清白蛋白包被的小瓶中。为减少较小囊泡的数量,我们在使用前直接用Whatmann 5.0微米孔径的硝酸纤维素滤膜过滤GUV溶液(15)。对于膜管化实验,使用神经节苷脂GM1和染料霍乱毒素488对外部膜叶进行染色,具体步骤如下:将上述氯仿中的脂质混合物转移到甲醇中,加入0.2重量%的GM1。然后按上述方法进行电膨胀。在样品制备前,向磷酸盐缓冲盐水(PBS)中加入50毫克/升的霍乱毒素488,仅对囊泡的外部叶进行染色。
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