产品名称：Cy5-Protein A，花菁素CY5-蛋白A的合成路线

合成与纯化

合成路线：

Protein A活化：

通过还原剂（如DTT）打开Protein A的二硫键，暴露半胱氨酸残基（若需马来酰亚胺标记）。

或直接使用赖氨酸残基（pH 8.0-9.0条件下）与Cy5-NHS酯反应。

Cy5标记：

Cy5-NHS酯与Protein A的氨基（赖氨酸ε-NH₂）反应，形成稳定酰胺键。

反应条件：PBS（pH 7.4），室温，1-2小时，避光。

纯化：

通过脱盐柱（如Zeba Spin）去除未反应Cy5，或通过尺寸排阻色谱（SEC）分离标记产物。

纯度要求：>95%（HPLC或SDS-PAGE检测）。

关键参数：

标记度（Dye:Protein ratio）：

通常为1:1至3:1，过高标记可能导致Protein A构象改变，降低IgG结合能力。

荧光量子产率：

标记后Cy5的量子产率应≥0.2（自由Cy5约为0.28），确保信号强度。

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