CY3-PIK3CA,CY3标记磷脂酰肌醇3-激酶的反应机制
PIK3CA基因编码磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)催化亚基α,参与细胞信号转导。Cy3标记PIK3CA一般指将荧光染料Cy3共价连接于PIK3CA蛋白或其片段,用于蛋白功能与定位研究。
反应机制解析:
标记位点的选择
PIK3CA蛋白含有多个赖氨酸残基的游离氨基以及可能的半胱氨酸巯基,常作为Cy3标记的靶点。
标记常发生于蛋白的表面暴露区域,避免影响蛋白活性。
Cy3染料的活性基团
Cy3多采用NHS酯或maleimide活性基团,分别针对氨基和巯基进行亲核性攻击,实现共价结合。
亲核攻击与键合形成
在碱性缓冲液中(pH 7.5-8.5),PIK3CA赖氨酸的氨基对Cy3-NHS酯的羰基碳发起亲核攻击,释放NHS,形成稳定酰胺键。
若标记半胱氨酸,巯基对Cy3-maleimide发生Michael加成,形成稳定硫醚键。
反应条件温和
为维持蛋白构象和功能,反应温度多控制在4℃至室温,缓冲液选择非还原性磷酸盐缓冲液,避免巯基氧化。
标记效率与特异性
反应效率受染料与蛋白摩尔比、pH、时间影响,适当调控保证理想标记率且不破坏蛋白结构。
反应特异性高,减少非特异结合和副反应。
纯化与功能保持
反应后通过透析或凝胶过滤去除游离染料,保持蛋白的活性和结构完整。
标记后的PIK3CA保留其激酶活性和与底物的结合能力。
产品名称:CY3-PIK3CA
纯度:95%+
性状:固体或液体
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
厂家:齐岳生物
关于我们
齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务,如活性酯(NHS酯)、马来酰亚胺(MAL)、叠氮(N₃)、炔基(alkyne)等,便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合,实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外,齐岳生物还提供定制染料标记服务,包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物,满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。
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