产品名称：FITC-NHS，异硫氰酸酯荧光素-活性酯的优势与局限性

一、注意事项

1. 避光操作

FITC-NHS对光敏感，所有步骤需在暗处或黄光下进行，防止荧光淬灭。

2. pH控制

反应缓冲液pH应保持在7.2-7.5（PBS）或8.5-9.0（CBS），避免酸性条件导致NHS酯水解或碱性条件导致蛋白变性。

3. 标记度控制

过度标记可能掩盖目标分子的活性位点（如抗体抗原结合位点），需通过预实验优化FITC-NHS与目标分子的摩尔比（通常标记度为1-5 FITC/分子）。

4. 纯度验证

通过HPLC或SDS-PAGE确认标记产物纯度，避免未反应FITC-NHS干扰实验（FITC-NHS在280 nm无吸收，可通过A₄₉₅/A₂₈₀比值评估纯度，优质产物比值>0.5）。

5. 储存条件

FITC-NHS需分装后-20℃冻存，避免反复冻融（每次冻融可能导致活性损失10%-20%）；标记产物需分装后-80℃保存，避免荧光淬灭。

二、优势与局限性

优势

高特异性：NHS酯与氨基反应具有高度选择性，减少非特异性结合。

强荧光信号：FITC量子产率高（约0.9），适合低丰度靶分子检测。

操作简便：反应条件温和（4℃，pH 7.4），无需复杂设备。

局限性

光淬灭：FITC荧光易受光照影响，需严格控制实验光照条件。

pH敏感性：NHS酯在pH>8.5时易水解，需优化缓冲液pH。

标记度限制：过度标记可能影响目标分子活性，需平衡荧光强度与功能保留。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

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