CY5-Lysozyme，CY5标记溶菌酶的反应机理特点

溶菌酶（Lysozyme）是一种存在于生物体液中的水解酶，主要由多肽链和赖氨酸残基、半胱氨酸残基组成，具有较高的水溶性和结构稳定性。通过Cyanine 5（Cy5）标记形成Cy5-Lysozyme，可以实现荧光示踪，用于研究蛋白质分布、酶动力学和纳米载体作用机理。

反应机理特点

偶联位点选择

溶菌酶分子中赖氨酸的ε-氨基和半胱氨酸的巯基是常用的反应位点。Cy5染料一般以NHS ester（对氨基反应）或马来酰亚胺（对巯基反应）形式提供，通过形成酰胺键或硫醚键实现共价偶联。赖氨酸偶联通常保持蛋白活性，而半胱氨酸偶联可能影响活性位点附近的构象，因此需根据实验需求选择合适位点。

NHS酯反应机理

在碱性缓冲液（pH 7.5–8.5）中，赖氨酸ε-氨基作为亲核试剂攻击Cy5-NHS ester的活性碳，形成稳定的酰胺键。此过程中，NHS离去基被取代，形成共价连接。反应温和，避免蛋白质结构破坏。

马来酰亚胺反应机理

半胱氨酸巯基在微碱性条件下脱质子形成亲核硫负离子，对Cy5马来酰亚胺的双键进行Michael加成反应，生成稳定的硫醚键。该反应特异性高，对其他氨基酸残基干扰小，但需避免过量标记引起蛋白构象改变。

反应条件优化

温度控制在室温至25°C，反应时间1–4小时可获得适度标记率。通过调节Cy5与Lysozyme摩尔比，可实现单标记或低标记度，保证酶活性。缓冲体系常用PBS或碳酸氢盐缓冲液，兼顾蛋白稳定性和反应效率。

产物表征

偶联完成后，Cy5-Lysozyme可通过透析或凝胶过滤去除游离染料。通过质谱（MS）、HPLC及荧光光谱分析，确认分子量变化和标记成功。酶活性可通过溶菌酶特定底物水解实验进行验证，以确保标记不破坏蛋白功能。

产品名称：CY5-Lysozyme，CY5标记溶菌酶

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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