Cyanine5-PEG-Catalase，CY5-聚乙二醇-过氧化氢酶的制备步骤

CY5-聚乙二醇-过氧化氢酶是将荧光团通过PEG连接臂以温和、可控的方式共价接入酶表面，既保留催化活性又赋予可视化能力。总体策略：先将Cy5与一端功能化PEG连接得到 Cy5-PEG-X（X 为可与蛋白共轭的末端基，如 NHS 酯、maleimide、DBCO 等），随后选择与过氧化氢酶（catalase）可接受的共价化学在温和条件下偶联。典型步骤如下：1）前体制备：合成或购置末端活化的 Cy5-PEG-NHS（或 Cy5-PEG-maleimide）。用无光、无氧避光操作并以干燥溶剂保存。2）酶预处理：将商业或自制过氧化氢酶在冰上溶解于缓冲（如 PBS pH 7.4 或 7.2 的磷酸盐缓冲）并进行透析或凝胶过滤以去除甘油、盐类或胺类缓冲物，保证自由氨基/巯基可用。测定蛋白浓度（UV280或Bradford）与活性基线（H2O2 分解速率）。3）偶联反应：若用 NHS 酯，则在 pH 7.2–7.8 缓冲中，按目标染料:蛋白摩尔比（常用 3–10:1）加入 Cy5-PEG-NHS 至酶溶液，0–4°C 避光反应 30 min–2 h；若采用 maleimide 则需先将蛋白的自由巯基通过温和还原（若必要）暴露并在 pH 6.5–7.0 条件下进行。监控反应进程可用小取样 SDS-PAGE（在非变性条件下荧光扫描）或吸光/荧光光谱。4）终止与去除过量试剂：用甘氨酸或Tris 缓冲终止 NHS 反应（消耗游离NHS酯），随后通过超滤（Amicon，MWCO 30–100 kDa）反复稀释回收，或用凝胶过滤柱（Sephadex G-25/G-50）分离游离Cy5-PEG与标记酶。5）纯化与浓缩：实施 SEC（Superdex 200 等）实现高分辨纯化并同时更换终保存缓冲（含甘油或蔗糖以保护酶）。6）质量与功能验证：测定标记度（DOL，degree of labeling）——通过结合谱学（用吸收谱算出 Cy5 与蛋白质的吸光比并换算标记数），SDS-PAGE 荧光与考马斯染色比对；酶活性测定（测定 H2O2 降解速率，compare 标记前后）以评估活性保留率；动态光散射（DLS）或 SEC-MALS 检测是否产生聚集体；紫外-可见与荧光光谱记录光学特性。7）终配制与保存：在含0.02% 抗菌剂、低温避光冻存（-20 至 -80°C，或短期 4°C）并记录失活动力学。

小贴士：选择短PEG（PEG3–PEG12）可减少空间位阻但可能影响酶活；长PEG（PEG-5000）有利于降低非特异吸附但可能遮蔽活性位点。控制标记度以平衡可视化信号与催化能力（常取 DOL 1–3）。反应与纯化全程避光、低温并快速评估活性，是保证高质量 CY5-PEG-Catalase 的关键。

产品名称：Cyanine5-PEG-Catalase，CY5-聚乙二醇-过氧化氢酶

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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