CY7.5-Angiopep-2，远红外荧光肽探针的合成步骤

CY7.5-Angiopep-2 是将Angiopep-2（序列：TFFYGGSRGKRNNFKTEEY，19 aa）与近红外染料 Cy7.5 共轭得到的远红外荧光肽探针。Angiopep-2 来源于 Kunitz 域，能与低密度脂蛋白受体相关蛋白-1（LRP-1）结合，通过受体介导的跨胞吞作用帮助分子穿越血脑屏障（BBB），常被用作将药物或示踪团递送至中枢神经系统的配体。

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Cy7.5 发射位于近红外区，可在组织自发荧光低背景下提供高灵敏信号。将染料通过不同化学手段（NHS 酯与肽的 N 端或 Lys；maleimide 与 Cys；点击化学通过 azide/alkyne）与 Angiopep-2 共轭，可得到不同连接方式的产物以满足生物学性能与构象稳定性的要求。为了减少染料对肽受体结合或跨膜转运活性的干扰，常引入柔性间隔（β-Ala、PEGn、AEEA）并控制染料与肽的标记度（DOL ≈ 0.8–1.0）。

表征采用 RP-HPLC（C18，梯度），ESI-MS / MALDI-TOF 验证分子量，UV-Vis/荧光谱测定染料吸收与发射峰并计算 DOL；必要时用 DLS / SEC 检测聚集态。成品以冻干粉或含少量防腐/稳定剂的缓冲液保存，避光、-20 ℃ 长期保存。

合成步骤（约460字）

设计与保护策略：确定共轭位点（常见：N-terminal α-amine、侧链 Lys、或在 C-terminus/N-terminus 外加 Cys）。若需 Lys 位点选择性标记，可在固相合成时使用 Lys(Mtt/ivDde) 做正交保护；若需巯基偶联则在序列末端或间隔引入 Cys(Trt)。为降低染料扰动，建议在标记位点与功能域之间引入 6-12 原子长度的 PEG（例如 AEEA 或 PEG3/PEG6）或 β-Ala。

固相肽合成（SPPS）：在 Rink amide 或 Wang 树脂上采用 Fmoc 化学自 C 端向 N 端合成 Angiopep-2。每一步用 HBTU/HATU + DIEA 或 DIC/Oxyma 偶联；对难耦合位点可加倍偶联或延长反应时间。侧链保护按照常规（Asn/Arg/ Lys/等分别用相应保护基团）。完成合成后若使用正交保护（例如 Lys(ivDde)）需在适当时机去除该保护以进行溶液相标记。

裂解与粗提纯：用 TFA/水/三异丙基硅烷（95:2.5:2.5）或等效裂解液裂解并去侧链保护，冷乙醚沉淀粗肽。粗品可通过 C18 固相萃取去除大部分挥发性/低性杂质。

染料活化物准备与偶联：常用方式：

NHS 酯法：若标记 N 端或 Lys，溶解肽于碳酸氢盐缓冲（pH 8.0–8.5）或微量有机溶剂混合液（DMSO），将 Cy7.5-NHS（1.1–1.5 当量）加入，室温避光反应 30–120 分钟。为抑制肽聚集可加入 5–10% HFIP、0.01–0.05% Tween-20 或低浓度尿素。

Maleimide 法：若肽含 Cys，先用 TCEP 还原（1–5 mM，pH 6.5–7.0），然后与 Cy7.5-maleimide（1.1–1.2 当量）在室温下反应 15–60 分钟，避免碱性条件以防止 maleimide 水解或胺侧反应。

点击化学：若使用 azide/alkyne 功能团，先在固相或溶液相装入相应手柄，再用 CuAAC 或 SPAAC（无铜）条件与 Cy7.5-alk/azide 连接（注意铜可能影响荧光/蛋白质，必要时用还原剂与螯合剂控制）。

纯化：反应后用 RP-HPLC（C18，梯度 5→60% ACN w/0.1% TFA，流速与柱型视规模而定）分离单标记产物。收集对应峰，冻干得到 TFA 盐形式纯肽。

表征：用 ESI-MS 或 MALDI-TOF 验证分子量；用 UV-Vis（确定染料吸收峰并计算 DOL）与荧光光谱测量发射特性；RP-HPLC 用于纯度评估（≥95% 优选）；如需评估功能性，可做体外细胞结合/内吞实验或 LRP-1 竞争结合实验

产品名称：CY7.5-Angiopep-2

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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