产品名称：AF350-Annexin V，Alexa Fluor350 标记膜联蛋白 V

AF350-Annexin V 是生物医学研究中用于细胞凋亡检测的特异性荧光探针，由膜联蛋白 V（Annexin V）与 Alexa Fluor 350（AF350）荧光染料通过共价偶联形成，依托 Annexin V 对磷脂酰丝氨酸（PS）的高亲和力结合特性，结合 AF350 独特的蓝色荧光信号，实现对细胞凋亡过程的精准识别与分析，尤其适用于多色荧光共标记实验，在细胞生物学、肿瘤学、药理学等领域应用广泛。

首先，回顾膜联蛋白 V（Annexin V）的核心生物学功能 —— 作为钙依赖性磷脂结合蛋白，其在 Ca²⁺存在下可特异性结合细胞膜上的磷脂酰丝氨酸（PS），而 PS 外翻（从细胞膜内侧到外侧）是细胞凋亡早期的标志性事件，这一特性使 Annexin V 成为凋亡检测的 “分子靶向载体”。与其他凋亡检测标志物（如 Caspase 活化、DNA 片段化）相比，PS 外翻发生时间更早（凋亡启动后 30 分钟内即可出现），且具有高度特异性，不易受细胞坏死等其他细胞死亡方式的干扰，因此以 Annexin V 为载体的探针，是检测早期凋亡的理想工具。AF350-Annexin V 中的 Annexin V 通常为重组表达的 Annexin A5（最常用的亚型），通过基因工程技术在原核细胞（如大肠杆菌）中表达纯化，具有纯度高（＞98%）、活性稳定、批次间差异小的优势，确保与 PS 结合的特异性与亲和力（解离常数 Kd 约为 10⁻⁹ M，属于高亲和力结合）。

其次，Alexa Fluor 350（AF350）是该探针的荧光信号来源，属于蓝色荧光染料，其光学特性经过优化，专为生物样本标记设计。AF350 的最大激发波长约为 346 nm，最大发射波长约为 442 nm，发射明亮的蓝色荧光，与荧光显微镜的 DAPI 滤光片系统（或专用紫外激发滤光片）兼容性良好，便于实验操作。相较于传统蓝色荧光染料（如 DAPI、Hoechst 33342），AF350 具有显著优势：一是荧光量子产率较高（约 0.45），在低探针浓度下即可产生可检测的蓝色荧光信号，降低探针用量，减少对活细胞的潜在毒性（如紫外光诱导的细胞损伤）；二是抗光漂白能力较强，虽然蓝色荧光染料普遍因激发光能量较高（紫外光）而易发生光漂白，但 AF350 通过化学结构修饰（如引入稳定基团），其光漂白速率较传统染料（如荧光素）降低约 30%，可满足短期动态观察实验（如 30-60 分钟的凋亡进程监测）；三是光谱分离度好，AF350 的发射光谱与绿色（如 AF488）、红色（如 AF594）荧光染料的重叠度极低（重叠系数＜0.05），这一特性使其成为多色荧光共标记实验的理想选择 —— 例如，可同时使用 AF350-Annexin V（标记凋亡细胞）、AF488 - 抗 Caspase-3 抗体（标记活化的 Caspase-3）、AF594 - 线粒体探针（标记线粒体），在同一视野下观察凋亡细胞的 PS 外翻、Caspase 活化与线粒体形态变化，实现多维度凋亡机制分析；四是 pH 稳定性较好，在 pH 4.0-8.0 范围内，AF350 的荧光强度波动小于 10%，不受细胞内溶酶体（酸性环境）或细胞质（中性环境）pH 差异的影响，确保不同细胞区域荧光信号的准确性。

在化学偶联制备方面，AF350 通常以活性酯（如 NHS 酯）形式与 Annexin V 偶联，反应原理与其他 Alexa Fluor 染料类似 ——AF350-NHS 酯的活性基团（N - 羟基琥珀酰亚胺酯）可与 Annexin V 分子上的氨基（主要来自赖氨酸残基的 ε- 氨基）发生酰胺化反应，形成稳定的 C-N 共价键，将荧光染料与蛋白连接。偶联过程需严格控制以下参数：一是反应 pH，维持在 7.2-7.5（使用 PBS 缓冲液），避免 pH 过高导致抗体变性或 pH 过低影响 NHS 酯活性；二是摩尔比例，AF350 与 Annexin V 的摩尔比通常为 2-3:1，这一比例可在保证荧光强度的同时，避免过多染料分子遮蔽 Annexin V 的 PS 结合位点（Annexin V 的 PS 结合位点含多个极性氨基酸，过多染料可能通过疏水作用干扰其结构）；三是反应时间与温度，室温（20-25℃）孵育 1-2 小时，避免高温导致蛋白变性。偶联完成后，需通过凝胶过滤层析（如 Sephadex G-25 层析柱）去除未偶联的游离 AF350—— 游离染料会导致非特异性荧光信号，干扰检测结果；同时，采用 Bradford 法或紫外 - 可见分光光度计测定蛋白浓度，确保产物中 Annexin V 的浓度符合实验需求（通常为 0.1-1 mg/mL）。此外，还需对产物进行质量验证：通过流式细胞术检测，验证 AF350-Annexin V 对凋亡细胞的标记效率（与已知凋亡诱导剂处理的细胞孵育后，阳性细胞比例应＞80%）；通过荧光显微镜观察，确认荧光信号集中在细胞膜表面（早期凋亡细胞），无明显细胞内弥散信号（排除染料泄漏或蛋白变性）。

产地：西安

规格：50mg 100mg 500mg

纯度：95%

状态：固体/粉末

储藏条件：冷藏

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！

西安齐岳生物科技有限公司是一家集研发，生产，销售为一体的高科技企业，可提供合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、顺磁/超顺磁性纳米颗粒、纳米金及纳米金棒、近红外荧光染料、活性荧光染料、荧光标记的葡聚糖BSA和链霉亲和素、蛋白交联剂、小分子PEG衍生物、点击化学产品、树枝状聚合物、环糊精衍生物、大环配体类、荧光量子点、透明质酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳纳米管、富勒烯等等，可以满足不同客户的定制需求。

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小编：HLL 2025年9月4日