产品名称:AF594 Wheat Germ Agglutinin,Alexa Fluor594 标记小麦胚芽凝集素
Alexa Fluor594 标记小麦胚芽凝集素(AF594-WGA)是生物医学研究中用于细胞表面糖基化分析和细胞膜标记的重要荧光探针,其核心功能在于将 AF594 红色荧光染料的高亮度、高光稳定性与小麦胚芽凝集素(WGA)的糖结合特异性相结合,为细胞生物学、病理学及药理学研究提供直观的可视化工具。从分子组成来看,该探针由两部分关键成分构成:一是 AF594 荧光染料,作为 Alexa Fluor 系列染料中的红色荧光代表,它具有卓越的光学性能,激发波长约为 590nm,发射波长约为 617nm,荧光量子产率高(约 0.6),光稳定性远优于传统的罗丹明类染料,能有效抵抗光漂白,确保长时间成像实验中荧光信号的持续稳定;同时,其荧光光谱与常见的绿色荧光染料(如 AF488)重叠度低,非常适合多色荧光共定位实验。二是小麦胚芽凝集素(WGA),一种从小麦胚芽中提取的凝集素蛋白,分子质量约为 36kDa,由两个相同的亚基组成,其核心生物活性是特异性结合细胞表面的糖基化结构,尤其对 N - 乙酰葡糖胺(GlcNAc)和唾液酸(Sia)具有高度亲和力 —— 这两种糖基广泛存在于哺乳动物细胞细胞膜的糖蛋白和糖脂中,如上皮细胞、内皮细胞及免疫细胞表面均有丰富表达,这种广谱且特异性的结合特性,使得 WGA 成为细胞膜标记和细胞表面糖基分析的理想分子工具。
在制备工艺上,AF594-WGA 的偶联生产需严格控制反应条件,以平衡染料的光学活性与凝集素的生物结合活性。常用的偶联方法为活性酯偶联法:首先对 AF594 染料进行化学修饰,引入 N - 羟基琥珀酰亚胺酯(NHS 酯)活性基团,该基团能与 WGA 分子表面赖氨酸残基的 ε- 氨基发生特异性酰胺化反应,形成稳定的共价键;偶联反应通常在 pH 7.2-7.4 的磷酸盐缓冲液(PBS)中进行,反应温度控制在室温(20-25℃),反应时间为 1-2 小时,期间需持续温和搅拌,确保反应均匀进行。制备过程中,关键控制点在于染料与 WGA 的摩尔比例(D/P 比),通常设定为 3-5:1,若 D/P 比过高,过多的染料分子修饰可能导致 WGA 的空间构象改变,破坏其糖结合位点,降低对 GlcNAc 和唾液酸的结合能力;若 D/P 比过低,则荧光信号强度不足,影响检测灵敏度,因此需通过紫外 - 可见分光光度法(检测 AF594 在 590nm 的吸光度和 WGA 在 280nm 的吸光度)精准计算 D/P 比,确保产物 D/P 比稳定在 3.5-4.5 的最佳范围内。偶联反应完成后,需通过凝胶过滤层析(如 Sephadex G-25 柱)进行纯化,利用分子质量差异(AF594-WGA 约 40kDa,游离 AF594 约 1kDa)分离偶联物与未反应的游离染料,同时通过透析去除反应体系中的小分子杂质(如 NHS、缓冲盐),最终获得纯度大于 95% 的 AF594-WGA 探针,减少非特异性结合带来的背景信号干扰。
在应用场景方面,AF594-WGA 凭借其对细胞膜糖基的特异性结合和红色荧光的高辨识度,在细胞成像、组织病理学分析、病毒入侵机制研究及药物筛选等领域发挥着重要作用。在细胞成像研究中,它是细胞膜标记的首选探针之一:由于 WGA 能快速结合细胞表面的糖基,AF594-WGA 可在短时间内(5-10 分钟)实现对活细胞或固定细胞的细胞膜标记,通过共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)或荧光显微镜,可清晰观察到细胞膜的完整形态,辅助研究细胞的形态变化(如细胞凋亡时的细胞膜皱缩、细胞迁移时的伪足形成);同时,其红色荧光信号可与绿色荧光标记的细胞内组分(如 AF488 标记的细胞骨架蛋白、线粒体探针)进行多色共定位,分析细胞膜与细胞内结构的相互作用,例如研究细胞内囊泡与细胞膜的融合过程。在组织病理学分析中,AF594-WGA 可用于组织切片中细胞边界的清晰标记,尤其在肿瘤组织切片分析中,能帮助区分肿瘤细胞与正常细胞的边界,观察肿瘤细胞的浸润范围,辅助肿瘤病理诊断;此外,由于肿瘤细胞表面的糖基化模式常发生异常改变(如唾液酸表达升高),AF594-WGA 的结合强度变化可作为肿瘤细胞糖基化异常的指标之一,为肿瘤的分子分型和预后评估提供参考。在病毒入侵机制研究中,许多病毒(如流感病毒、冠状病毒)通过识别宿主细胞表面的唾液酸或 GlcNAc 作为入侵受体,AF594-WGA 可与病毒竞争结合这些糖基受体,通过观察荧光信号的变化,分析病毒与宿主细胞的结合效率,揭示病毒入侵的分子机制;同时,也可利用 AF594-WGA 标记的细胞膜,追踪病毒进入细胞后的运输路径,为抗**药物的作用靶点研究提供依据。在药物筛选领域,AF594-WGA 可用于评估药物对细胞表面糖基化的影响:某些药物(如抗肿 药物、抗炎药物)可能通过调节细胞的糖基转移酶或糖苷酶活性,改变细胞表面糖基的表达水平,通过检测 AF594-WGA 与细胞的结合荧光强度,可快速筛选出能调控细胞糖基化的候选药物,加速药物研发进程。
产地:西安
规格:50mg 100mg 500mg
纯度:95%
状态:固体/粉末
储藏条件:冷藏
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!
西安齐岳生物科技有限公司是一家集研发,生产,销售为一体的高科技企业,可提供合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、顺磁/超顺磁性纳米颗粒、纳米金及纳米金棒、近红外荧光染料、活性荧光染料、荧光标记的葡聚糖BSA和链霉亲和素、蛋白交联剂、小分子PEG衍生物、点击化学产品、树枝状聚合物、环糊精衍生物、大环配体类、荧光量子点、透明质酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳纳米管、富勒烯等等,可以满足不同客户的定制需求。
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小编:HLL 2025年9月4日