DMPE-CY5，CY5标记二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱的反应条件

DMPE–Cy5 为将 Cyanine5（Cy5）荧光团共价连接到磷脂 PE 头基的脂类荧光探针，保留两条 C14（肉豆蔻）疏水链用于嵌入脂质双层，而 Cy5 提供强的近红外/深红色发射（激发约 ~650 nm，发射约 ~670 nm），适用于脂质体/外泌体/细胞膜示踪、多通道成像与 FRET 实验。共价键合使染料不易从膜上脱落，利于长时间成像与定量示踪。

合成步骤概述（要点、按步骤）

试剂准备：购买或制备 DMPE（1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine）（可为盐型如 HCl 形式需先中和）与 Cy5-NHS（Cy5-succinimidyl ester）。干燥无水溶剂：DMF 或 DMSO（化学反应溶剂），氯仿/甲醇用于溶解与萃取。干燥剂与惰性气体（N₂）备用。碱性试剂常用 DIPEA 或三乙胺（TEA）作捕获生成的酸并促进酰胺化。

溶解与脱水：将 DMPE 用氯仿/甲醇（9:1）溶解后旋转蒸发成薄膜，再置于真空干燥以去除痕量水分；或直接在无水 DMF 中溶解（优先无水条件）。Cy5-NHS 在少量无水 DMF 中配成储备液（避光）。

反应配比：按摩尔比 DMPE : Cy5-NHS = 1 : 1.1–1.5（轻微过量的 NHS 酯有助驱动反应），加入 DIPEA（约 2–5 等当量）以保持碱性。全部在惰性气氛下操作并避光。

反应条件：室温振荡搅拌 4–16 小时（视浓度与溶解性，可在 0–25 °C 调节）。若溶解度问题，可用少量 CHCl₃/DMF 共溶后反应。用 TLC（硅胶，CHCl₃/MeOH/H₂O 微量梯度）或 analytical HPLC 监控消耗与产物形成（脂类-染料迁移特性与起始物不同）。

反应终止与粗分离：反应后加入水或缓冲溶液淬灭过量 NHS 酯，进行液-液萃取（有机相 CHCl₃），洗去水溶性杂质（残余 NHS、二价盐等）。有机相用无水 Na₂SO₄ 干燥，过滤并浓缩。

纯化：脂类-染料通常用两种方法纯化：

硅胶柱层析（常用洗脱体系 CHCl₃→CHCl₃/MeOH→CHCl₃/MeOH/H₂O，小心保留性磷酸酯部分）；

反相 preparative HPLC（更常用、回收率好）：乙腈/水 梯度（可含 0.1% 甲酸或三氟乙酸调节峰形）对分离 Cy5 含脂类产物与未反应脂类、游离染料为有效。选择性收集具有 Cy5 吸收（~650 nm）的分馏峰。

干燥与储存：纯品用旋转蒸发低温浓缩后冷冻干燥或用氮气吹干并溶于少量无水乙醇或 CHCl₃/MeOH，分装避光、在 −20 °C（或 −80 °C 长期）保存，避免反复冻融。

表征要点（用于确认结构与纯度）

• UV-Vis/荧光：确认 Cy5 特征吸收峰（~640–650 nm）与发射（~660–680 nm），比对摩尔吸光系数。

• 质谱（ESI-MS 或 MALDI-TOF）：验证共价连接后分子量增量（出现 [M]+ 或 [M+Na]+ 峰）。

• HPLC 分析：反相 HPLC 确定纯度（目标 > 95%）。

• ¹H NMR / ³¹P NMR：脂类 NMR 能提供头基与甘油骨架信号（注意大分子与疏水链使峰形展宽），³¹P 可确认磷酸骨架完整性。

• TLC/磷脂分析（如 磷含量测定 或 薄层色谱显色法）可作为辅证。

• 功能验证：将 DMPE–Cy5 加入脂质体或细胞膜模型中，检测荧光嵌入行为、光稳定性及迁移/分布（荧光显微或光谱学测定）。

注意事项与替代策略

• 若目标为 DMPC–Cy5（PC 头基），因无游离胺，需先用功能化 PC（如含胺衍生 PC、或引入 PEG-NH₂ 链）或通过点击化学（azide/alkyne）将预先修饰的脂质与 Cy5-标签偶联。

• 控制水分与避光对高产率与避免 Cy5 水解/降解为关键。

• 染料-脂类的聚集态可影响分离与表征，反相 HPLC 与质谱通常可靠。

产品名称：DMPE-CY5，CY5标记二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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