FITC-Dynorphin A,1-10,荧光素标记神经肽的表征方法
FITC-Dynorphin A (1–10) 是一种通过将异硫氰酸荧光素(FITC, Fluorescein isothiocyanate)与神经肽Dynorphin A的1–10氨基酸序列偶联形成的荧光探针分子。Dynorphin A是一类内源性κ-阿片受体激动肽,其1–10氨基酸片段保留了与受体结合和生物活性的核心序列。通过荧光素标记,FITC-Dynorphin A (1–10)不仅能够保持原肽的识别能力,还可在光学分析中实现实时追踪和定量检测,是研究神经肽与受体相互作用、细胞摄取机制及信号传导的有力工具。
在分子构建上,FITC-Dynorphin A (1–10)通常选择肽链的N端氨基作为标记位点。FITC的异硫氰酸基团(–N=C=S)是一种高度亲电的官能团,能够与肽链上的伯胺发生亲核加成,形成稳定的硫脲键(–NH–C(=S)–NH–)。该共价连接方式确保荧光团与肽链结合牢固,同时不干扰肽链的空间构象和活性中心。偶联反应通常在弱碱性条件下(pH 8.0–9.0)进行,以保持肽链氨基去质子化,提高亲核性,并在温和的溶液体系中避免肽链降解。
在纯化方面,由于反应体系中通常含有未反应的FITC、杂肽或副产物,需通过高效液相色谱(HPLC)进行分离。逆相HPLC(RP-HPLC)是常用的方法,利用疏水性差异分离FITC标记肽与未标记肽。通过调节有机溶剂梯度(如乙腈/水体系)和流速,可获得高纯度产物。此外,凝胶渗透色谱(GPC)或亲和色谱也可作为辅助纯化,用于去除低分子量杂质和未结合的FITC分子。纯化后的产物通常冻干保存,以保持稳定性和活性。
在表征方面,FITC-Dynorphin A (1–10)可通过多种分析进行验证。紫外-可见光谱(UV-Vis)可显示FITC特征吸收峰(约495 nm),用于初步确认荧光标记的存在;荧光光谱检测(激发495 nm,发射520 nm)可量化荧光信号强度,评估标记效率。质谱(MS)是确认分子量和标记位点的核心,通过比较未标记肽与标记肽的分子量差异,可以确定FITC偶联情况。此外,氨基酸分析或HPLC积分峰面积可用于估算标记肽的纯度和修饰率。
FITC-Dynorphin A (1–10)的纯化与表征保证了其在生物化学研究中的可重复性和可靠性。在体外细胞实验中,该荧光标记肽可用于追踪肽的胞内摄取路径,分析内吞和跨膜动力学;在受体结合实验中,荧光信号可直接反映肽与κ-阿片受体的结合能力与分布情况;在多通道成像系统中,可与其他荧光标记分子共同使用,实现动态监测和共定位分析。
总体而言,FITC-Dynorphin A (1–10)兼具荧光可视化功能和神经肽生物活性。其纯化通过RP-HPLC等方法实现高纯度分离,表征依赖UV-Vis、荧光光谱及质谱等确认结构与标记效率。通过稳定的硫脲键连接FITC,产物在光学分析和生物实验中表现出高度可靠性,为神经肽功能研究、受体动力学分析及荧光示踪实验提供了重要工具。
产品名称:FITC-Dynorphin A,1-10,荧光素标记神经肽
纯度:95%+
性状:固体或液体
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
厂家:齐岳生物
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齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务,如活性酯(NHS酯)、马来酰亚胺(MAL)、叠氮(N₃)、炔基(alkyne)等,便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合,实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外,齐岳生物还提供定制染料标记服务,包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物,满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。
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