FITC-Protein A,FITC-重组蛋白A的化学特性
FITC-重组蛋白A(FITC-Protein A)是一种通过荧光素异硫氰酸酯(FITC)与重组蛋白A(Protein A, rProtein A)共价结合而得到的荧光标记蛋白衍生物。重组蛋白A是一种由金黄色葡萄球菌提取或重组表达的免疫球蛋白G(IgG)结合蛋白,具有特异性结合抗体Fc段的能力。蛋白A分子中富含赖氨酸残基和N端伯氨基,为FITC的共价标记提供理想的反应位点。通过FITC标记,重组蛋白A不仅保留了与IgG的高亲和力结合特性,同时获得荧光可视化能力,使其应用于免疫分析、抗体检测、药物递送和生物成像等领域。
在化学特性方面,FITC-Protein A的偶联反应主要基于FITC分子上的异硫氰酸酯基团(–N=C=S)与蛋白A分子表面赖氨酸残基或N端氨基的亲核加成反应,形成稳定的硫脲键(–NH–C(S)–NH–)。该共价键的形成不仅牢固,而且在生物体系中具有良好的稳定性,保证了FITC标记的长期荧光信号。偶联反应通常在碳酸盐缓冲液(pH 8.3–9.0)中进行,以确保氨基的去质子化和高亲核性,同时避免蛋白质结构受损。整个过程需在避光条件下进行,以防FITC分子光降解。
FITC-Protein A在水溶液中表现为良好的溶解性和稳定性。由于Protein A本身具有高度折叠的多域结构,FITC标记不会破坏其三级结构和抗体结合活性。适度标记的FITC-Protein A通常每分子结合1–3个FITC分子,可保证荧光强度的同时保持蛋白A与IgG Fc段的高亲和力。过量标记可能导致分子构象改变或聚集,从而降低结合能力。
在光学特性方面,FITC-Protein A具有典型的绿色荧光特性,激发波长约495 nm,发射波长约520 nm,适用于荧光显微镜、流式细胞术以及ELISA等免疫检测方法中的直接观察或定量分析。通过紫外-可见光谱和荧光光谱可以确定标记度和荧光性能。紫外-可见光谱中FITC的吸收峰在495 nm,蛋白A自身的280 nm吸收峰可用于计算标记摩尔比。
在化学稳定性方面,FITC-Protein A能够在中性和弱碱性溶液中长期稳定存在,不易水解或荧光衰减,适合储存和重复使用。其分子结构中的硫脲键具有较强的化学稳定性,同时保持Protein A的折叠域和抗体结合位点。常见表征方法包括SDS-PAGE结合荧光成像、质谱分析以及动态光散射(DLS)等,用于评估标记效果、分子完整性和溶液状态。
此外,FITC-Protein A的化学特性还体现在其高度选择性和多功能性上。其既能与IgG的Fc段特异性结合,又通过FITC荧光信号实现可视化追踪,可用于构建荧光免疫复合体系、检测抗体分布、研究抗原-抗体相互作用以及评估药物载体的靶向性能。其兼具稳定的共价偶联结构、良好的溶解性、荧光特性和高特异性,使其在化学研究和生物分析中具有重要应用价值。
产品名称:FITC-Protein A,FITC-重组蛋白A
纯度:95%+
性状:固体或液体
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
厂家:齐岳生物
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