FITC-transferrin，FITC转铁蛋白的反应机制

FITC-转铁蛋白（FITC-Transferrin, FITC-Tf）是一种通过荧光素异硫氰酸酯（FITC）与转铁蛋白（Transferrin, Tf）分子共价偶联而得到的荧光标记蛋白。转铁蛋白是一种约80 kDa的血浆糖蛋白，主要功能为结合铁离子并将其运输至细胞内。其分子含有多个赖氨酸残基和N端伯氨基，为FITC的共价标记提供理想的反应位点。通过FITC标记，转铁蛋白不仅保留了铁离子结合能力和受体识别特性，同时获得可视化荧光信号，使其在细胞示踪、受体介导的内吞研究及药物递送体系构建中具有应用价值。

FITC-转铁蛋白的制备步骤主要包括以下几个环节：

1. 缓冲液准备与蛋白溶解

首先，将纯化的转铁蛋白溶解于碳酸盐缓冲液（pH 8.3–9.0）中，使蛋白保持构象并提供适宜的氨基环境。碱性条件有利于蛋白赖氨酸残基上的氨基去质子化，从而增强其亲核性，便于与FITC分子的异硫氰酸酯基团发生加成反应。同时，为防止FITC在水溶液中自水解，整个操作需避光进行。

2. FITC溶解与加入

FITC通常溶解于少量的干燥DMSO或碳酸盐缓冲液中形成浓缩溶液。溶解后，按照预定摩尔比缓慢加入到转铁蛋白溶液中。摩尔比控制通常为1:5至1:10（蛋白:FITC），以保证标记度适中，既能获得足够的荧光信号，又不破坏转铁蛋白的构象和铁结合能力。加入FITC后，溶液需轻柔混匀，避免剧烈振荡导致蛋白变性。

3. 偶联反应

加入FITC后，溶液在4°C至室温条件下缓慢反应2–12小时，反应时间根据蛋白浓度和所需标记度调整。在此过程中，FITC分子的异硫氰酸酯基团与转铁蛋白赖氨酸残基的氨基发生亲核加成，形成稳定的硫脲键（–NH–C(S)–NH–），实现荧光标记。整个反应需避光，以避免FITC光降解导致荧光减弱。

4. 反应终止与纯化

反应完成后，使用透析、凝胶过滤色谱或超滤方法去除未反应的自由FITC。透析通常在4°C下进行，使用生理盐缓冲液或PBS，既可去除小分子杂质，又能保持蛋白稳定性。凝胶过滤色谱可同时实现荧光标记蛋白的分级纯化，去除低分子量游离FITC，提高标记产物纯度和均一性。

5. 浓缩与储存

纯化后的FITC-Tf可通过超滤浓缩至所需浓度，通常储存在4°C避光条件下，并添加少量防腐剂或稳定剂，以延长荧光信号和蛋白活性稳定性。标记后的FITC-Tf在水溶液中呈透明状态，具有绿色荧光特性（激发波长495 nm，发射波长520 nm），可用于荧光显微成像、流式细胞术及受体介导的内吞研究。

通过以上步骤，FITC-转铁蛋白获得了稳定的荧光标记，同时保持了转铁蛋白与铁离子结合及受体识别的功能。其反应步骤的关键在于pH控制、FITC与蛋白摩尔比以及反应时间的优化，以保证荧光信号强度和蛋白生物活性的平衡。该方法操作简便、可控性强，是制备荧光示踪蛋白的重要技术路线。

产品名称：FITC-transferrin，FITC转铁蛋白

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

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齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.09