Fluo-4 AM，钙离子荧光探针的核心化学结构

Fluo-4 AM（Fluo-4 acetoxymethyl ester）是一种应用于细胞内钙离子（Ca²⁺）检测的荧光探针，是Fluo-3 AM的改进型产品，具有更高的荧光强度和更优的信噪比。Fluo-4 AM由荧光染料Fluo-4和两端的AM酯基组成，其化学结构经过优化，以提高对Ca²⁺的敏感性、细胞膜透过性和生物相容性。Fluo-4 AM在活细胞内通过胞内酯酶水解AM酯基，释放出活性Fluo-4分子，从而可实现对细胞内游离Ca²⁺浓度的动态可视化。

Fluo-4的核心化学结构属于荧光黄素衍生物，包含苯基二氧吖啶（xanthene）荧光核和羧基侧链。羧基是Ca²⁺结合的主要配位位点，其电子云结构能够与Ca²⁺形成稳定配位复合物。在未结合Ca²⁺时，Fluo-4分子呈现低荧光状态（荧光猝灭），Ca²⁺结合后分子构象发生改变，猝灭效应减弱，荧光强度增强。相较于Fluo-3，Fluo-4在相同激发条件下发射更强的绿色荧光（激发波长约494 nm，发射波长约516 nm），信号更亮且背景更低，因此在高背景或低Ca²⁺环境下检测效果更佳。

Fluo-4 AM的AM酯化修饰使其分子带非性特性，能够穿过细胞膜进入胞内。AM酯基掩蔽了Fluo-4分子上的羧基负电荷，提高脂溶性和膜渗透性。进入胞内后，非特异性羧酸酯酶水解AM酯，生成带负电荷的活性Fluo-4分子，该分子因羧基的电荷作用被困留在胞质内，不易逸出。这种设计保证了探针在胞外不产生荧光干扰，同时在胞内实现高效、稳定的Ca²⁺检测。

Fluo-4 AM的化学组成还包括辅助成分和衍生基团。例如，在实验制备中，Fluo-4 AM常与表面活性剂如Pluronic F-127共同使用，以提高水溶性和分散性，促进均匀分布和细胞摄取。Fluo-4分子的芳香核结构稳定，对光照和温度具有一定抵抗力，保证在荧光成像或流式细胞术过程中荧光信号持久且可重复检测。

此外，Fluo-4 AM的化学组成还体现了其对离子选择性和反应动力学的优化。羧基侧链与Ca²⁺的配位结合具有高选择性，避免与Mg²⁺等其他二价离子产生交叉反应。荧光响应快速且可逆，使其能够实时追踪细胞内Ca²⁺的瞬时波动。Fluo-4分子设计还考虑到生物相容性，保持低和高稳定性，适用于多种哺乳动物细胞、原代细胞及组织切片的检测。

在实际应用中，Fluo-4 AM通常溶解于DMSO或缓冲液中，孵育细胞一定时间后通过酯酶水解形成活性Fluo-4。随后通过荧光显微镜或流式细胞仪检测绿色荧光变化，实现对Ca²⁺浓度的定量分析。Fluo-4 AM因其化学组成合理、信号强烈、响应快速和生物兼容性好，被用于神经科学、心肌研究、药物筛选及细胞信号转导等领域。

综上所述，Fluo-4 AM的化学组成包括荧光核心Fluo-4、可水解AM酯基、羧基侧链及辅助分散组分，其设计保证了膜透过性、荧光响应强度、Ca²⁺选择性以及细胞内稳定性。这一化学组成使Fluo-4 AM成为高灵敏度、低背景、高生物相容性的细胞内钙离子荧光探针，为活细胞钙信号研究提供了可靠工具。

产品名称：Fluo-4 AM，钙离子荧光探针

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

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