Mito-Tracker Red CMXRos，线粒体红色荧光探针的反应条件

Mito-Tracker Red CMXRos 是一种经典的线粒体特异性红色荧光探针，应用于活细胞线粒体成像和功能研究。该探针属于阳离子、亲脂性小分子，能够依赖线粒体膜电位选择性积累于线粒体内膜和基质区域。其分子结构通常由环状罗丹明（rhodamine）衍生的发色团构成，带有正电荷，使其在带负膜电位的线粒体中富集，同时保持荧光信号的稳定性。其激发波长约为 579 nm，发射峰约为 599 nm，呈现明亮的红色荧光，适合与绿色荧光探针（如 GFP、FITC）联合使用，实现多通道成像。

Mito-Tracker Red CMXRos 的反应条件主要涉及其染色机理与活细胞使用方式。该探针的线粒体选择性积累依赖于膜电位差，因此在染色过程中必须保持线粒体膜电位的完整。实验通常在 37°C、5% CO₂ 的细胞培养条件下进行，以保证细胞代谢活跃、膜电位稳定。使用时，通常将储备液（一般溶解于 DMSO 中）稀释至 50–500 nM 的工作浓度，然后加入培养基中直接孵育细胞 15–30 分钟。染色时间不宜过长，以防止探针非特异性分布或光效应。

Mito-Tracker Red CMXRos 的染色效率还受细胞类型、膜电位状态和溶液组成影响。在膜电位降低的情况下（如通过 FCCP 或 CCCP 等去化剂处理），探针无法积累在线粒体中，荧光信号明显减弱。因此，为获得稳定的染色效果，实验中应避免高浓度代谢抑制剂或端 pH 条件。染色后，可以直接进行活细胞成像，也可在轻度固定后观察，但固定条件需温和（如低浓度多聚甲醛，≤4%），以避免膜电位丧失导致荧光信号衰减。

此外，Mito-Tracker Red CMXRos 可与其他荧光标记物联合使用进行多通道成像。其红色发射峰与绿色、蓝色荧光探针光谱区分度良好，因此在共聚焦显微镜、多光子显微镜或荧光显微成像中，可以同时观察线粒体、细胞核、溶酶体等多个亚细胞结构。为了优化荧光强度和信噪比，实验中通常建议使用缓冲液（如 HBSS 或 PBS）稀释探针，并在暗条件下孵育，避免光漂白。

Mito-Tracker Red CMXRos 的化学反应条件还涉及其在固定条件下的共价结合特性。探针分子含有可与蛋白质巯基或胺基发生共价反应的活性基团，因此在固定过程中，它能够与线粒体内蛋白质形成稳定共价键，使得荧光信号在细胞固定后仍保持。这一特性与其他仅依赖膜电位的探针不同，使 CMXRos 系列在活细胞成像和固定样品分析中都表现出良好适应性。

总体而言，Mito-Tracker Red CMXRos 的反应条件可总结为：① 活细胞染色需在保持线粒体膜电位的温和条件下进行（37°C，5% CO₂）；② 储备液通常用 DMSO 配制，稀释至纳摩尔至低微摩尔浓度使用；③ 孵育时间适中（15–30 分钟），避免非特异性分布；④ 固定条件需温和，以保持膜电位依赖的荧光信号或利用其共价结合特性稳定染色；⑤ 与其他荧光探针兼容，可实现多通道成像。凭借这些反应条件，Mito-Tracker Red CMXRos 在线粒体定位、膜电位评估及细胞功能研究中被采用，是研究细胞能量代谢和线粒体相关生物学过程的重要工具。

产品名称：Mito-Tracker Red CMXRos

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

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