RB-BSA，罗丹明标记牛血清白蛋白的纯化处理

RB-BSA（Rhodamine B-Bovine Serum Albumin）是一种将罗丹明 B（Rhodamine B, RB）荧光染料与牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin, BSA）共价偶联形成的荧光标记蛋白。BSA 是一种高度水溶性、稳定且使用的载体蛋白，具有丰富的赖氨酸残基，适合作为荧光团偶联的靶点。通过与 RB 偶联，RB-BSA 不仅保留了 BSA 的生物兼容性和水溶性，同时获得了强烈、稳定的橙红色荧光信号，使其应用于免疫检测、荧光成像、药物递送体系标记及蛋白质相互作用研究等实验领域。

从化学结构上看，RB-BSA 由两部分组成：① BSA 蛋白核心，含多个赖氨酸残基和羧基残基，可提供亲核位点用于荧光偶联，同时保证水溶性和稳定性；② 罗丹明 B 荧光团，通常以 NHS 酯或异氰酸酯形式存在，通过酰胺键或脲键与蛋白赖氨酸侧链偶联，实现荧光标记。偶联设计通常确保荧光团空间独立于蛋白活性位点，以避免干扰 BSA 的结构和功能。

RB-BSA 的合成过程通常包括以下几个步骤：

罗丹明 B 活化：将 RB 转化为活性酯形式（如 RB-NHS 酯），使其羰基碳具有良好的亲电性，便于与蛋白赖氨酸残基的初级氨基形成稳定酰胺键。活化通常在有机溶剂（如 DMF）中进行，并加入适量碳二亚胺类试剂（如 DCC 或 EDC）生成活性中间体。

蛋白准备：BSA 溶解在适宜的缓冲液中（如 pH 7.4 的 PBS 或碳酸盐缓冲液），确保蛋白处于构象，同时保持赖氨酸残基的可用性。缓冲体系的 pH 控制在 7–8，以优化酰胺键形成效率并减少蛋白变性。

偶联反应：将 RB-NHS 酯缓慢加入 BSA 溶液中，充分混匀，使 RB 的羰基碳与 BSA 的赖氨酸初级氨基发生亲核取代反应，生成稳定的酰胺键，同时释放 N-羟基琥珀酰胺副产物。反应通常在室温下避光进行 2–6 小时，以保证荧光团和蛋白的稳定性。反应摩尔比可根据所需标记密度进行调节，避免过度标记导致蛋白构象破坏。

纯化处理：偶联反应完成后，通过透析、超滤或凝胶过滤柱（如 Sephadex G-25）去除未反应的 RB、低分子副产物及缓冲盐，获得高纯度、可水溶的 RB-BSA。纯化过程中需避免长时间光照和高温，以保持荧光团活性和蛋白构象。

表征确认：通过紫外-可见光光谱测定 RB 的吸收峰（λ_max ≈ 540–555 nm）、荧光光谱测定发射特性（λ_em ≈ 565–580 nm），结合 SDS-PAGE 或质谱（MALDI-TOF）分析蛋白标记程度和分子量变化，可确认 RB-BSA 偶联成功。偶联后的 RB-BSA 应显示橙红色荧光，水溶性良好，结构稳定，适合后续实验使用。

RB-BSA 兼具 BSA 的水溶性和生物相容性，以及罗丹明 B 的高亮度荧光特性，可用于免疫分析、纳米载体标记、蛋白质-蛋白质相互作用研究以及荧光追踪实验。通过合理设计偶联条件和纯化方法，可获得稳定、高效的标记蛋白，为分子生物学和化学研究提供可靠的实验工具。

综上所述，RB-BSA 是通过 BSA 赖氨酸残基与 RB-NHS 酯偶联形成的荧光标记蛋白，其合成过程包括 RB 活化、蛋白准备、偶联反应、纯化及表征。偶联设计合理，兼顾蛋白功能和荧光性能，应用于免疫检测、荧光成像及药物递送体系的研究中，是蛋白标记和功能化的重要工具分子。

产品名称：RB-BSA，罗丹明标记牛血清白蛋白

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

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齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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