RhodamineB-PEG-ConA，RB-聚乙二醇-刀豆球蛋白A的合成路线与步骤

RB-聚乙二醇-刀豆球蛋白A是一类典型的荧光标记糖结合蛋白复合物，其基本构成包括三个部分：荧光染料Rhodamine B（RB）、柔性间隔臂聚乙二醇（PEG）以及糖结合蛋白刀豆球蛋白A（Concanavalin A, ConA）。Rhodamine B为常见的罗丹明类荧光染料，具有高量子产率、强烈的可见光吸收（λ_abs≈550 nm）与发射（λ_em≈570 nm），且在水溶液和生物环境中稳定性良好。PEG片段作为疏水染料与亲水蛋白之间的柔性间隔基团，能够有效减少空间位阻与疏水聚集，同时提升复合物的溶解性与生物相容性。ConA是一种四聚体植物凝集素，具有特异识别α-D-甘露糖和α-D-葡萄糖残基的能力，常用于糖生物学研究、细胞表面糖链探针及糖蛋白分离。通过在ConA上引入RB-PEG荧光标记，不仅保持其对糖基的结合活性，还赋予其荧光可视化功能，用于糖链成像、细胞识别和微阵列检测。

合成路线与步骤

RB-PEG-ConA的制备可分为三个关键阶段：①荧光染料RB与PEG链的连接；②带活性基团的RB-PEG衍生物的制备；③RB-PEG与ConA的偶联。

RB-PEG前体合成

Rhodamine B分子通常含有羧基（RB-COOH），可利用该羧基与氨基-PEG进行缩合反应。常用的PEG间隔臂分子为氨基-PEG-NHS或氨基-PEG-甲酯。

以RB-COOH与氨基-PEG为起始物，加入EDC（1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺）和NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）活化羧基，形成RB-NHS酯中间体。

随后与氨基-PEG反应，生成RB-PEG-NH2或RB-PEG-COOH等带有活性末端的荧光化PEG分子。此步骤需在无水DMF或DMSO中进行，并在惰性氮气保护下反应，以避免水解。产物可通过透析或柱层析纯化。

RB-PEG活性化

为便于后续与蛋白质ConA偶联，需将RB-PEG转化为活性酯或含有可与赖氨酸侧链氨基反应的功能基团。常用方法包括：

将RB-PEG-COOH再次通过EDC/NHS活化，生成RB-PEG-NHS酯。

或采用马来酰亚胺修饰PEG链末端，合成RB-PEG-MAL，用于与蛋白巯基偶联。

RB-PEG与ConA的偶联

ConA蛋白表面存在丰富的赖氨酸残基氨基（–NH2），可与NHS酯发生酰胺键偶联。

将纯化的ConA溶于PBS缓冲液（pH 7.4），维持蛋白构象稳定。

缓慢加入RB-PEG-NHS溶液，通常在4 °C下温和搅拌反应数小时，避免过度修饰导致活性丧失。

通过透析或凝胶过滤去除未反应的RB-PEG，得到RB-PEG-ConA。若使用马来酰亚胺策略，则需先对ConA进行巯基化处理（如用Traut’s试剂引入巯基），再与RB-PEG-MAL偶联。

特点与应用

终产物RB-PEG-ConA为荧光糖结合蛋白探针，具有以下特点：

荧光性能优异：RB信号强烈，适合显微成像和流式检测。

结构柔性与稳定性：PEG链降低蛋白表面修饰后的构象扰动，维持ConA的糖结合活性。

特异性结合：仍能识别多糖、糖蛋白及细胞表面糖链。

应用范围广：可用于糖生物学研究、细胞膜糖链成像、糖基识别阵列、药物递送系统中的糖靶向修饰。

通过合理设计PEG链长与RB标记比例，可在保持ConA活性的同时化荧光信号，获得一种高灵敏度、特异性的糖链探针。

产品名称：RhodamineB-PEG-ConA，RB-聚乙二醇-刀豆球蛋白A

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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