RhodamineB-PEG-Cytochrome c，RB-聚乙二醇-细胞色素C的合成步骤

RhodamineB-PEG-Cytochrome c 是一种荧光修饰的金属蛋白衍生物，由罗丹明B（Rhodamine B）、聚乙二醇（PEG）和细胞色素C（Cytochrome c, Cyt c）组成。Cyt c 是线粒体电子传递链中的重要电子载体，其分子量约12 kDa，含有血红素（Heme）辅基，结构中含有多个赖氨酸残基（–NH2），为化学修饰提供了反应位点。通过在Cyt c表面修饰荧光基团，可以实现对其转运、分布和功能的追踪；而PEG链的引入则有效提升其水溶性、降低聚集性并改善血浆稳定性。

在结构合成方面，首先需要将RhodamineB功能化。常见的方法是使用RhodamineB异硫氰酸酯（RB-ITC）或RhodamineB-NHS酯，以便与蛋白质赖氨酸残基的氨基发生特异性反应，形成稳定的脲键或酰胺键。然而，直接修饰Cyt c往往会影响其空间构象或血红素活性，因此通常通过PEG作为柔性连接桥。

具体合成步骤一般为两步：第一步，将RhodamineB偶联至末端带有活性基团的PEG上，如NH2-PEG或NHS-PEG，形成RB-PEG中间体。该步骤可在无水有机溶剂或弱碱性水溶液中进行，反应后通过透析去除未反应的小分子。第二步，将RB-PEG与Cyt c偶联，通常采用EDC/NHS活化Cyt c的羧基侧链，或直接利用PEG链末端的NHS活性酯与Cyt c赖氨酸残基的氨基缩合，得到RB-PEG-Cyt c。反应需在温和条件下进行（pH 7.2–7.4，4–25 ℃），以避免蛋白失活或血红素结构破坏。

合成完成后，产物可通过凝胶过滤层析（如Sephadex G-75）或超滤（MWCO 10–30 kDa）进行分离，去除游离染料与未偶联的PEG。由于Cyt c本身在410 nm处有Soret吸收峰，而RhodamineB在554 nm处有特征吸收峰，因此通过UV-Vis光谱可同时验证血红素和荧光基团的共存。

进一步的表征手段包括：① 荧光光谱检测发射峰（580–590 nm）确认荧光性能；② SDS-PAGE 在荧光扫描模式下检测标记效率；③ MALDI-TOF质谱确认蛋白修饰度；④ 圆二色谱（CD）分析蛋白二级结构变化，确保标记过程未严重影响Cyt c构象；⑤ 动态光散射（DLS）检测其分散性与粒径变化。

综上，RB-PEG-Cyt c 的结构合成兼顾了荧光探针性能与蛋白活性保持，通过PEG的柔性桥梁实现染料与蛋白质的温和偶联，为线粒体相关研究、细胞凋亡过程追踪以及纳米药物递送体系提供了关键工具分子。

产品名称：RhodamineB-PEG-Cytochrome c，RB-聚乙二醇-细胞色素C

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

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齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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