CY5-cRGDyK-Liposome，花菁染料CY5标记cRGDyK修饰的脂质体的纯化过程

CY5-cRGDyK-Liposome 是一种新型功能化纳米脂质体，其构建原理是将近红外荧光染料Cy5标记的小分子肽cRGDyK修饰到脂质体表面，从而兼具荧光成像与靶向递送功能。Cy5作为经典花菁染料，激发波长约为640–650 nm，发射波长集中在670–680 nm，能够在生物透明窗口内实现高灵敏度成像。cRGDyK（环状精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列衍生肽）是一类高亲和性RGD环肽，能够特异性识别细胞膜上的整合素受体（如αvβ3），常用于肿瘤靶向递送与细胞黏附研究。将二者结合并修饰在脂质体表面，不仅能够实现对目标细胞或组织的特异性靶向，同时可利用Cy5的荧光信号对脂质体分布、细胞摄取与体内代谢进行实时追踪。

在制备上，脂质体通常由磷脂（如DSPC、DPPC、Egg-PC等）、胆固醇以及功能化脂质（如DSPE-PEG2000-MAL或DSPE-PEG2000-NHS）构成。首先通过薄膜分散法或乙醇注入法形成纳米脂质体，再利用PEG化脂质与cRGDyK肽的连接基团（常为巯基-马来酰亚胺反应或NHS-酰胺键偶联）将cRGDyK偶联到脂质体表面。随后引入Cy5标记的cRGDyK肽或直接使用Cy5修饰的脂质，将其嵌入脂质体膜表面，终得到稳定的CY5-cRGDyK-Liposome。该体系不仅具有脂质体载药与缓释功能，还具有高度的生物相容性和成像能力。

在纯化过程中，需去除未结合的Cy5染料和游离cRGDyK肽，以避免背景信号干扰。常用方法包括：

凝胶过滤层析（Sephadex G-50或Sepharose CL-4B）：通过分子大小差异分离游离染料/肽与脂质体，操作简便且保持脂质体完整性。

超滤离心（MWCO 100 kDa滤膜）：利用分子量截留作用浓缩脂质体并去除小分子杂质。

密度梯度离心（蔗糖或碘克沙醇梯度）：根据颗粒密度分离纯化脂质体，能有效区分不同组分但操作相对复杂。

透析法：适合大批量制备，通过缓慢扩散去除未结合小分子，但耗时较长。

经过纯化后，CY5-cRGDyK-Liposome的质量与稳定性需通过系统表征。首先，动态光散射（DLS）用于测定粒径分布和多分散性指数（PDI），一般粒径控制在80–150 nm之间，利于体内循环与肿瘤EPR效应；Zeta电位测定可评估表面电荷，反映胶体稳定性。其次，紫外-可见光谱与荧光光谱用于确认Cy5的吸收峰与发射峰是否保持，避免荧光猝灭或漂移；荧光定量分析可用于计算Cy5的偶联效率与修饰密度。对于肽修饰情况，常通过HPLC或MALDI-TOF质谱确认cRGDyK与脂质的偶联效率。进一步，可采用**透射电子显微镜（TEM）或冷冻电镜（Cryo-EM）**观察脂质体的形貌，验证其均一性与球形结构。

此外，表征中还需考察探针的稳定性，包括在PBS、血清及不同pH条件下的荧光保持率、粒径变化以及聚集趋势。稳定的CY5-cRGDyK-Liposome在体内应用中能维持长时间循环并实现靶向富集，而不会因染料泄漏或肽解离导致信号衰减。后，在功能性检测上，可以通过**细胞摄取实验（流式细胞术、共聚焦显微镜）**评估cRGDyK修饰所带来的靶向性增强效应，并通过对比未修饰或非特异性肽修饰脂质体进行验证。

综上所述，CY5-cRGDyK-Liposome是一种典型的功能化荧光纳米脂质体，融合了脂质体的载药优势、cRGDyK的靶向识别特性以及Cy5的成像能力。通过合理的制备与严格的纯化方法，结合多维度的表征，可以获得具有良好分散性、稳定性和靶向能力的荧光探针，为纳米药物递送系统和生物成像研究提供重要工具。

产品名称：CY5-cRGDyK-Liposome

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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