Cyanine5-CRP，花菁染料CY5标记C反应蛋白的合成过程

C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）是一种急性期血浆蛋白，属于五聚体结构的免疫球蛋白样蛋白质，常用于炎症水平和免疫应答的检测。其分子量约115 kDa，由五个相同亚基组成，每个亚基含有多个赖氨酸残基，可作为化学修饰的活性位点。将荧光染料花菁染料Cy5标记在CRP上，可制备出Cyanine5-CRP荧光探针，兼具生物学识别功能与荧光成像特性，常用于免疫学研究、荧光成像、ELISA检测与传感器构建等领域。

合成过程

Cy5常以活性酯（如Cy5-NHS ester）的形式与蛋白质结合。首先，将CRP溶解于合适缓冲液中（通常为0.1 M NaHCO₃ 或PBS，pH 7.4–8.3），以确保赖氨酸残基的ε-氨基处于去质子化状态，利于与NHS酯反应。随后，将Cy5-NHS ester溶解于DMSO或DMF中，并逐滴加入蛋白溶液。典型摩尔比为Cy5与CRP亚基比例在5–10:1之间，可实现较高的标记效率。反应需避光，在室温下进行1–2小时，生成稳定的酰胺键连接的Cyanine5-CRP。

纯化过程

合成后的混合物中包含未结合的游离Cy5染料，必须经过纯化以确保探针的特异性与信噪比。常用的纯化方法有：

凝胶过滤层析（Sephadex G-25或Superdex 200）：根据分子大小分离，CRP标记物作为大分子组分率先洗脱，游离染料则滞后。

超滤离心（MWCO 100 kDa滤膜）：利用分子量差异，反复超滤可有效去除游离Cy5小分子。

透析法：将反应体系放入透析袋中，透析液为PBS或Tris缓冲液，数小时到一天即可清除游离染料。

纯化后的Cyanine5-CRP需进一步表征。首先通过UV-Vis吸收光谱检测是否出现Cy5的特征吸收峰（λmax ≈ 650 nm），并结合蛋白质的280 nm吸收计算标记效率。其次通过荧光光谱确认Cy5的发射峰是否保持在670–680 nm区间。蛋白完整性与标记均一性可通过SDS-PAGE及质谱进行分析。后，功能性验证可通过免疫结合实验确认Cyanine5-CRP仍保持其生物识别能力。

综上，Cyanine5-CRP的制备过程包含染料活化、共价偶联与纯化分离，所得产物兼具光学探针与生物活性分子双重属性，为免疫学研究、炎症检测与生物成像提供了高灵敏度工具

产品名称：Cyanine5-CRP，花菁染料CY5标记C反应蛋白

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.09