Cy5-UDCA，花菁染料CY5标记熊去氧胆酸的表征方法

熊去氧胆酸（Ursodeoxycholic acid, UDCA）是一种次级胆汁酸，分子骨架为甾体类四环结构，C-24 端含有羧基，C-3 与 C-7 位存在羟基，具有亲水与疏水两性特征。为了实现其荧光可视化及分子追踪，常采用花菁染料 Cy5 与 UDCA 进行共价偶联，得到 Cy5-UDCA。其制备方法主要分为以下几个步骤：

原料准备与活化

UDCA 分子上的 C-24 羧基是主要的修饰位点。首先将 UDCA 溶于无水二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亚砜（DMSO），加入适量碳二亚胺（EDC）与 N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），使羧基活化生成 NHS 酯。这一过程通常在室温或略低温度（15–25 ℃）下进行，以避免副反应产生。

Cy5 染料引入

选用 Cy5-NH2 或 Cy5-amine 作为标记基团。由于 Cy5 本身具有亲水性（带磺酸基），在水相/有机相混合体系中仍具有良好溶解性。将 Cy5-NH2 溶解在 DMSO 中，缓慢滴加至 UDCA-NHS 酯的反应体系。通过羧基与氨基的缩合反应，形成稳定的酰胺键，将 Cy5 共价偶联到 UDCA 分子上。

反应条件

通常在室温至 30 ℃ 范围内搅拌 12–24 小时，保证反应完全。为了避免光漂白或光降解，反应过程应在避光条件下进行。缓冲体系常选择 pH 7.4 的 PBS 或碳酸盐缓冲液，以保证氨基处于适宜的反应状态。

纯化步骤

反应结束后，粗产物中可能包含未反应的 Cy5 染料、游离 UDCA 及副产物。常用方法为：

透析法（分子量截留膜 1–3 kDa），去除小分子未反应物；

高效液相色谱（HPLC），根据疏水性差异分离目标产物；

冻干处理，获得 Cy5-UDCA 粉末。

产物表征

Cy5-UDCA 的结构可通过多种技术验证：

UV-Vis 吸收光谱：在 640 nm 附近有 Cy5 特征峰；

荧光光谱：发射峰在 660–670 nm；

质谱（MALDI-TOF 或 ESI-MS）：分子量较 UDCA 增加约 700–800 Da；

NMR：显示 C-24 羧基转化为酰胺的化学位移变化。

储存条件

Cy5-UDCA 需避光保存，低温（−20 ℃）冻干粉末状态佳，溶液状态下可短期储存在 4 ℃。避免反复冻融，以保持其光学活性和结构稳定性。

综上，Cy5-UDCA 的制备方法核心在于 C-24 羧基的活化与 Cy5-NH2 的酰胺化反应。该方法操作简便、反应条件温和，得到的偶联产物兼具 UDCA 的疏水骨架与 Cy5 的近红外荧光特性，适合后续在药物递送、胆汁酸代谢追踪及膜相互作用研究中的应用。

产品名称：Cy5-UDCA，花菁染料CY5标记熊去氧胆酸的

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.09