Sulfo-CY5.5-NHS（2419286-92-1）水溶性花菁染料CY5.5标记N-羟基琥珀酰亚胺酯的合成步骤

Sulfo-CY5.5-NHS（2419286-92-1）是一种带磺酸基的近红外花菁染料活化酯，结构上保留Cy5.5类长波段荧光核心并在适当位置引入羧基，通过转化为N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯使其能够高效、选择性地与胺基（例如蛋白质赖氨酸、肽链N端）形成稳定酰胺键，从而作为生物偶联试剂用于标记、肽修饰与分子探针构建。磺酸基（sulfo-）的存在增强了分子的水溶性、降低疏水聚集并改善在生物缓冲液中的分散性。该活化酯对水敏感、对胺类亲核试剂反应活性高，适用于缓冲体系下快速标记。

合成步骤（示例工艺）：

前体准备：以Sulfo-CY5.5-COOH（即带末端羧基且为磺酸化形式的染料前体）为起始物。确保前体干燥、纯度高（通过反相HPLC确认），并在避光条件下称量于干燥器中。

溶剂与试剂配置：选择无水DMF或DMSO为反应溶剂以降低水解；准备水溶性偶联试剂EDC·HCl（或DCC可替代，但易产生难溶副产物）与N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），并备无水碱如DIPEA或三乙胺以调节反应pH并捕获生成的盐酸。

活化反应：在干燥无水、避光条件下，将Sulfo-CY5.5-COOH溶于DMF（浓度视尺度而定，常0.5–10 mM）。在0 ℃至室温下，加入NHS（1.2–2.0当量）和EDC·HCl（1.2–2.0当量），并缓慢加入DIPEA（约2当量）以维持微碱性环境。搅拌1–3小时（或至反相HPLC/LC-MS显示羧酸消失、NHS酯峰出现）。若使用DCC，则在低温加入并在反应后过滤掉生成的DCU沉淀。

反应监控与终止：用LC-MS或反相HPLC监控生成物；反应完成后用少量冰冷二氯甲烷或乙腈稀释并迅速加入少量水以终止多余活化剂（注意避免大量水以免水解NHS酯）。若使用DCC，先滤去沉淀再转入后处理。

粗提与预处理：将反应液通过硅胶快速除去非性杂质（仅在溶剂相容时）或直接将溶液做半制备HPLC前的简单脱盐（透析/固相萃取C18 SPE，洗脱以含有少量有机相的水相）。

纯化：推荐使用半制备反相C18 HPLC进行精制，流动相为水（含0.1%甲酸或0.1%甲酸铵）—乙腈梯度洗脱。收集目标吸收/荧光峰并合并相应馏分；为去除低分子杂质，可对馏分进行再洗脱或SPE处理。

干燥与换盐：将纯品溶液冻干得到粉末；如果需要特定盐型，可通过离子交换或用适当盐（如Na+）置换得到磺酸钠盐形态，提高水溶性与批间一致性。

表征与质量控制：用高分辨质谱（HR-MS）确认分子量；用UV-Vis测定λmax与摩尔消光系数，用荧光光谱测发射峰和量子产率；用反相HPLC确认纯度（>95%为佳）。记录水解稳定性（在pH 7.4缓冲下的半衰期）以指导使用条件。

储存与使用注意：NHS酯易水解，纯品宜在无水、避光、-20 ℃下干燥保存，使用时在无水或低水分溶剂中短期配制并立即用于偶联。偶联反应一般在pH 7.5–8.5的碳酸盐或磷酸缓冲中进行，配比及时间控制以提高标记效率并减少交联。操作需在通风橱并佩戴防护，避免直接接触与吸入。

产品名称：Sulfo-CY5.5-NHS

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物.

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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