FITC-L-Glucose，异硫氰酸荧光素标记L-葡萄糖的纯化方法

FITC-L-Glucose 是通过将 FITC（Fluorescein isothiocyanate）与 L-葡萄糖偶联得到的荧光标记糖衍生物。L-，-，-葡萄糖为 D-葡萄糖的光学对映体，含多个羟基结构，通过氨基化衍生后与 FITC 的异硫氰酸基发生硫脲键偶联。纯化与表征是保证其结构完整性、荧光性能和实验可靠性的关键步骤。

1. 纯化方法

凝胶过滤（Sephadex/G-25）：通过分子大小差异去除未反应的 FITC 分子及小分子杂质。FITC-L-，-，-Glucose 分子量较大，能够在柱内较早洗脱，而 FITC 游离分子滞留，完成初步分离。

高效液相色谱（HPLC）：反相 HPLC（C18 柱）常用于进一步纯化。以水-乙腈缓冲梯度洗脱，利用荧光检测（λ_ex = 488 nm, λ_em = 520 nm）监控 FITC 含量，分离纯度可达 >95%。

透析或超滤：可去除低分子量副产物及盐类，提高产物溶液纯度，适合水溶性糖衍生物的终制备。

2. 表征

质谱（MS）：确认 FITC-L-，-，-Glucose 的分子量及硫脲键形成情况。高分辨质谱可清晰显示加合产物分子峰，并区分未偶联糖或 FITC。

核磁共振（NMR）：¹H-NMR 和 ¹³C-NMR 可验证糖环结构完整性以及硫脲键的形成。质谱结合 NMR 提供结构确认的双重保障。

紫外-可见光谱（UV-Vis）：FITC 的吸收峰（约 495 nm）可用于验证偶联是否成功，同时用于浓度测定。

荧光光谱：FITC-L-，-，-Glucose 在溶液中显示典型绿光荧光（λ_em ≈ 520 nm），荧光强度和光稳定性可评估标记效果。

薄层色谱（TLC）：利用荧光成像板可直观检测反应完成情况及纯度。

3. 注意事项

避光操作：FITC 易光漂白，纯化和表征过程中需避光。

缓冲体系：pH 控制在 7–9，可保持糖环稳定，同时防止 FITC 水解。

温度控制：室温或低温操作，避免糖或荧光团降解。

4. 纯化与表征意义

纯度保证：去除游离 FITC 避免非特异性信号干扰实验。

结构确认：质谱和 NMR 确认硫脲键形成及糖环保留，为后续生物实验提供可靠基础。

荧光性能评价：确保 FITC-L-，-，-Glucose 在实验体系中的可探测性和稳定性。

应用扩展：纯化后的标记糖可用于糖识别、糖转运、荧光成像及化学反应机理研究。

产品名称：FITC-L-Glucose，异硫氰酸荧光素标记L-葡萄糖

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

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