FITC-Lactose，异硫氰酸荧光素标记乳糖的合成步骤研究

FITC-Lactose 是通过异硫氰酸荧光素（Fluorescein Isothiocyanate, FITC）与乳糖（Lactose, Gal(β1→4)Glc）偶联形成的荧光标记二糖。乳糖分子具有还原性葡萄糖单元和非还原半乳糖单元，表面暴露羟基（–OH）官能团，为荧光素标记提供了可控的反应位点。通过 FITC 偶联，乳糖分子获得绿色荧光特性（激发约495 nm，发射约520 nm），可用于糖-蛋白相互作用研究、分子示踪及化学分析。

FITC-Lactose 的偶联基于 FITC 异硫氰酸基（–N=C=S）与乳糖分子中官能团的共价反应：

• 乳糖的羟基或还原性醛基在轻碱性环境下具有一定亲核性，可与 FITC 异硫氰酸碳发生亲核加成。

• 在常规条件下，主要通过还原性葡萄糖单元的羟基或氨基衍生物（若乳糖先经过氨基化处理）与 FITC 偶联，形成稳定的氨基异硫氰酸酯键或荧光糖醇衍生物。

• 偶联反应温和，通常在缓冲液（如碳酸盐缓冲液，pH 8–9）中进行，以保持乳糖结构完整和荧光团电子体系不受干扰。

该反应原理保证了 FITC-Lactose 的化学稳定性和可控荧光性质，同时避免糖分子发生过度氧化或降解。

2. 合成步骤研究

1. 乳糖处理与氨基化预处理

• 乳糖分子含羟基和还原性醛基，直接与 FITC 偶联效率有限。为提高偶联效率，可通过氨基化反应将乳糖的还原性端羰基转化为伯胺或二级胺衍生物。

• 氨基化常用氨或氨基醇试剂，在温和条件下进行，形成可与 FITC 偶联的氨基乳糖。

2. FITC 溶液制备

• FITC 溶解于干燥有机溶剂（如 DMSO 或乙醇）中，形成高浓度储备液。

• 避免水分和光照，以防荧光团水解或氧化。

3. 偶联反应条件优化

• 将 FITC 储备液缓慢加入乳糖溶液或氨基乳糖溶液中，保证缓冲体系轻碱性（pH 8–9），常温反应数小时。

• 反应摩尔比、温度及搅拌速率需优化，以平衡偶联效率与糖分子结构完整性。

• 在反应过程中，通过取样和薄层色谱（TLC）或高效液相色谱（HPLC）监控产物形成，确保反应充分。

4. 副产物控制与反应终止

• 偶联过程中可能存在未反应 FITC 和氨基乳糖的副产物。

• 反应结束后，可加入少量低分子胺（如甘氨酸）封闭剩余 FITC 异硫氰酸基，避免游离荧光团干扰后续分析。

5. 纯化方法研究

• 高效液相色谱（HPLC）：反相或亲水相色谱可有效分离 FITC-Lactose 与未反应物。

• 透析或超滤：分子量截断膜去除低分子量 FITC 与副产物。

• 凝胶过滤（GFC）：利用分子筛分离荧光标记糖与小分子杂质，提高产物纯度。

• 不同纯化方法的组合可实现产物高纯度、高回收率，并保持荧光性能和结构完整性。

6. 结构与性质表征研究

• 质谱（MS）：确认分子量和偶联产物形成。

• 核磁共振（NMR）：¹H NMR、¹³C NMR 分析糖骨架和荧光团连接位点。

• 紫外-可见光谱（UV-Vis）与荧光光谱：验证荧光团完整性，测定激发及发射峰。

• 高效液相色谱（HPLC）纯度分析：量化偶联效率和产物纯度。

产品名称：FITC-Lactose 

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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