Calcein tetraethyl acid，4`,5`-双[N,N-二(羧甲基)氨甲基]荧光素的反应条件

4’,5’-双[N,N-二(羧甲基)氨甲基]荧光素，通常称为Calcein tetraethyl acid，是荧光素衍生物的一种，广泛用于细胞活性检测、金属离子示踪及荧光成像研究。其分子结构由荧光素核心与两个N,N-二(羧甲基)氨甲基取代基组成，取代基通过氨甲基桥接连接到荧光素的4’、5’位置。

Calcein tetraethyl acid呈强绿色荧光，激发峰约在495 nm，发射峰约在515 nm，量子产率高、光稳定性良好。分子结构中含有多个羧基，使其在水相和缓冲体系中高度溶解，并具有良好的金属离子螯合能力。荧光强度对金属离子浓度敏感，适合用于金属离子测定、活性染料标记及膜通透性实验。

2. 化学组成特点

1. 荧光素核心
   荧光素核心提供稳定的共轭体系，使分子具有强荧光发射。共轭平面结构确保荧光量子产率高，适合细胞及分子示踪实验。

2. N,N-二(羧甲基)氨甲基取代基
   两个N,N-二(羧甲基)氨甲基取代基赋予分子水溶性和离子化能力，同时提供螯合金属离子的位点。羧基的存在使Calcein tetraethyl acid在缓冲液和水溶液中高度分散，不易聚集，同时可与钙、镁等二价金属离子形成稳定配合物。

3. 功能化特性
   分子末端羧基可与氨基化分子形成酰胺键，便于化学标记和共价结合，使Calcein tetraethyl acid可用于荧光标记、探针合成及载体功能化。

3. 反应条件

Calcein tetraethyl acid的合成和功能化通常包括羧基活化、氨基偶联及缓冲体系控制，主要反应条件如下：

1. 羧基活化

• 使用N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）或类似活化试剂将羧基转化为活性酯。

• 反应在有机溶剂（如DMF或DMSO）中进行，以保证活化效率和溶解性。

• pH控制在弱碱性范围（pH 7–8）可优化活化和减少副反应。

1. 氨基偶联反应

• 活化羧基与氨基化底物（如多肽、蛋白质或小分子）在缓冲液中反应形成酰胺键。

• 温和条件下进行（室温至37℃），反应时间通常为1–12小时，以保证反应完全且避免荧光素结构降解。

1. 缓冲体系选择

• 反应多在PBS（磷酸盐缓冲液）或HEPES缓冲液中进行，pH维持在7.2–8.0。

• 缓冲体系需避免高浓度金属离子或强氧化剂，以防干扰羧基活化或荧光信号。

1. 纯化与稳定性

• 反应完成后通过高效液相色谱（HPLC）、凝胶渗透或透析纯化产物，去除未反应试剂和副产物。

• 产物在低温、避光条件下储存，可保持荧光性能和化学稳定性。

产品名称：4’,5’-双[N,N-二(羧甲基)氨甲基]荧光素

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

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齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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