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AF594 Concanavalin A的关键特性与稳定性,AF594
发布时间:2025-11-26     作者:wyh   分享到:

产品名称:AF594 Concanavalin A的关键特性与稳定性,AF594

1. 分子结构与功能设计

AF594荧光特性:AF594(Alexa Fluor 594)属于磺化罗丹明类荧光染料,激发波长590–594 nm,发射波长615–620 nm,呈现亮红色荧光。具有高量子产率(>0.9)、良好光稳定性和抗淬灭能力,适配共聚焦显微镜、流式细胞术及多色荧光成像(如与GFP、DAPI联用)。

Concanavalin A(Con A)特性:从伴刀豆中提取的植物凝集素,分子量约104 kDa,由四个亚基组成。特异性识别α-甘露糖、α-葡萄糖残基及寡糖链(如糖蛋白、糖脂),常用于细胞表面糖基化分析、细胞黏附研究及生物传感器开发。

偶联策略:AF594通过NHS酯或马来酰亚胺基团与Con A的氨基(-NH₂)或巯基(-SH)共价偶联,形成稳定酰胺键或硫醚键,确保荧光标记不影响Con A的糖结合活性。

2. 关键特性与稳定性

糖靶向识别:Con A在弱碱性(pH 7.4–8.5)下与糖类分子结合,酸性条件解离,适用于肿瘤细胞(高表达唾液酸)或炎症部位糖基化蛋白的靶向识别。

生物相容性与水溶性:PEG链修饰(如AF594-PEG-Con A)可增强水溶性,减少非特异性吸附;AF594的磺酸基团提升染料的水溶性和抗蛋白结合能力。

化学稳定性:生理pH下稳定,但极端pH(<3或>10)、高温(>60℃)或强氧化剂可能导致水解或氧化;避光、干燥、-20℃保存可维持长期稳定性,避免反复冻融。

光稳定性:AF594抗光漂白能力良好,支持长时间荧光追踪;Con A在光照下可能发生构象变化,需避光操作。

3. 合成与质控

合成路径:

化学偶联:AF594-NHS酯与Con A的氨基在pH 8.0–8.5缓冲液中反应,形成稳定酰胺键;或通过马来酰亚胺-巯基反应实现定向偶联。

纯化方法:采用凝胶过滤层析(如Sephadex G-25)或超滤离心去除游离染料,确保标记效率(通常每分子Con A标记1–4个AF594分子)。

质量控制:通过SDS-PAGE验证Con A的完整性,荧光分光光度计测定标记效率,HPLC/质谱确认分子量分布;DLS测定纳米颗粒粒径(50–200 nm),PDI≤1.05。

AF594 Concanavalin A

关于我们:

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