产品名称:HRP Tomato lectin的偶联方法与反应机制
1. 结构组成与酶-凝集素协同作用
HRP(辣根过氧化物酶):作为标记酶,催化底物(如DAB、TMB或荧光底物)产生颜色变化或荧光信号,适用于免疫组化(IHC)、免疫荧光(IF)及酶联免疫吸附试验(ELISA)。其活性依赖血红素辅基,在过氧化氢(H₂O₂)存在下催化氧化反应。
Tomato lectin(番茄凝集素):特异性结合N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和唾液酸,常用于细胞表面糖蛋白、糖脂的标记,研究细胞信号传导、迁移及分化过程。
2. 偶联方法与反应机制
偶联原理
化学交联:通过戊二醛、EDC/NHS等交联剂,将HRP的氨基(-NH₂)与Tomato lectin的氨基/羧基连接,形成共价键(如Schiff碱或酰胺键)。
反应优化:需控制pH(7.4)、温度(25℃)、反应时间(2小时)及交联剂浓度,平衡偶联效率与酶/凝集素活性保留。避光操作防止酶失活,透析去除未反应交联剂及副产物。
功能验证
酶活性保留:通过酶促反应(如催化TMB氧化)检测HRP活性,确保信号放大能力。
生物活性保留:通过糖结合实验(如凝集素-糖基相互作用检测)验证Tomato lectin的特异性结合能力,如与GlcNAc/唾液酸化糖蛋白的结合效率。
稳定性评估:通过加速老化实验(如37℃孵育)评估偶联产物的长期稳定性,确保实验可重复性。
3. 应用场景与功能扩展
免疫组化(IHC)
结合Tomato lectin的靶向性,实现肿瘤组织、炎症病灶的特异性标记,辅助病理诊断。例如,在乳腺癌诊断中,标记肿瘤细胞表面糖蛋白,评估恶性程度。
通过酶促反应放大信号,提升低丰度靶标的检测灵敏度,适用于微量样本分析。
免疫荧光(IF)与流式细胞术
用于细胞表面糖蛋白的荧光标记,研究细胞亚群分布、信号传导及迁移过程。
结合多色荧光标记,实现多靶标同时检测,提升实验通量与信息量。
肿瘤靶向成像与诊疗一体化
结合Tomato lectin的肿瘤靶向性,实现肿瘤组织的近红外荧光成像或核医学成像(如PET),指导手术或疗效监测。
整合药物递送系统,实现靶向治疗与成像的协同作用,推动诊疗一体化发展。

关于我们:
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