产品名称:BAPTA-NHS,BAPTA琥珀酰亚胺酯的偶联方法与反应机制
1. 偶联方法与反应机制
偶联原理
化学键形成:BAPTA-NHS的NHS酯基团与目标分子(如蛋白质、抗体)的氨基在碱性条件(pH 8.0-9.0,25℃)下发生亲核取代反应,形成稳定的酰胺键(-CONH-)。
反应优化:需避光操作以防止NHS酯水解,控制反应时间(1-2小时)以平衡偶联效率与副反应。反应后通过透析或层析纯化,去除未反应的BAPTA-NHS及副产物。
反应机制
亲核取代反应:目标分子的氨基作为亲核试剂,攻击NHS酯的羰基碳,形成四面体中间体,随后脱去NHS,生成酰胺键。
动力学控制:反应速率受pH、温度、浓度影响,需优化条件以确保高效偶联并避免过度反应导致目标分子失活。
2. 产物验证与应用场景
产物验证
偶联效率:通过荧光标记(如FITC)或质谱分析验证BAPTA-NHS与目标分子的偶联效率,确保每个目标分子标记的BAPTA数量可控。
钙离子螯合能力:通过钙离子滴定实验(如荧光光谱、电化学方法)验证偶联产物是否保留BAPTA的钙离子螯合能力。
稳定性评估:通过加速老化实验(如37℃孵育)评估偶联产物的长期稳定性,确保实验可重复性。
应用场景
钙离子检测:用于细胞内钙离子浓度检测(如荧光成像、流式细胞术),研究钙离子依赖的生理过程。
蛋白质标记:将BAPTA偶联到蛋白质或抗体上,用于钙离子依赖的蛋白质相互作用研究。
药物递送:结合钙离子响应型载体,实现药物在钙离子浓度梯度下的可控释放。
生物传感器:开发钙离子敏感的生物传感器,用于实时监测细胞内钙离子动态变化。

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