AF647-Glucose oxidase，AF647标记葡萄糖氧化酶的反应原理

AF647-Glucose oxidase是一种荧光标记的酶分子，由水溶性荧光染料Alexa Fluor 647（AF647）与葡萄糖氧化酶（Glucose oxidase, GOx）通过共价偶联形成。AF647具有吸收峰约650 nm、发射峰约668 nm的特性，荧光信号强、稳定且水溶性良好。通过将AF647标记在GOx分子上，可实现酶的可视化追踪，用于体外实验、载体研究和酶活性分析等。AF647-Glucose oxidase的反应步骤设计在保持酶活性和荧光性能的前提下完成，以确保标记分子既可检测又可功能化。

反应原理

葡萄糖氧化酶是一种含有氨基酸残基的蛋白质分子，分子链上含有丰富的氨基（主要是赖氨酸残基）和羟基官能团，是AF647偶联的主要反应位点。AF647通常以NHS酯活性形式存在，能够与GOx的游离氨基形成稳定的酰胺键，实现共价固定。该反应在温和条件下进行，避免破坏酶的三级结构和催化活性。

反应步骤

1. 酶溶液准备
   将GOx溶解于适宜的缓冲液中（通常使用pH 7.0–7.5的PBS或碳酸盐缓冲液），保证酶溶液均匀且无沉淀。缓冲液选择需兼顾酶活性和NHS酯反应效率，避免含有会与NHS酯反应的自由胺（如Tris）。

2. 荧光染料溶解
   AF647-NHS酯通常溶解于干燥的有机溶剂（如DMSO或DMF）中，制备高浓度储备液。溶解后应避免长时间光照，以防荧光团光漂白。

3. 混合反应体系
   将荧光染料储备液按设定摩尔比缓慢加入GOx溶液中。摩尔比通常控制在1:1至5:1之间，以调节标记密度，同时避免过度标记影响酶活性。混合后轻轻搅拌，使染料均匀分布并充分接触酶分子。

4. 偶联反应进行
   反应体系在室温或轻微低温条件下进行，反应时间一般为1–2小时。NHS酯与赖氨酸残基的氨基发生亲核加成，形成稳定的酰胺键。反应过程中保持pH在7.0–7.5范围，保证酶结构稳定及NHS酯反应活性。

5. 反应终止与缓冲交换
   反应结束后，通过加入甘氨酸或Tris缓冲液可终止NHS酯反应，清除未反应的活性酯。此步骤可防止多余染料对酶活性产生干扰。

6. 纯化
   偶联产物中含有未反应的染料和副产物，需要通过透析、凝胶过滤或分子筛柱进行纯化。纯化后的AF647-GOx溶液去除小分子杂质，保留标记酶分子及荧光性能。

7. 表征与活性验证
   纯化后的产物可通过紫外-可见光吸收光谱和荧光光谱确认荧光标记成功。同时，通过酶活性测定（如比色法检测H₂O₂生成）验证标记后GOx仍保持催化功能，确保实验可用性。

产品名称：AF647-Glucose oxidase

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.09