产品名称:Rhodamine B-L-Glutamine的纯化与表征关键步骤
1. 结构特性与功能协同
核心组分
Rhodamine B:含氧杂蒽母核的荧光染料,激发/发射波长约540/580 nm(橙红色荧光),具有高量子产率、光稳定性及生物相容性,支持活细胞/活体成像。
L-Glutamine:条件必需氨基酸,参与蛋白质合成、能量代谢(如三羧酸循环)及细胞信号传导,在肿瘤细胞中高消耗(“谷氨酰胺成瘾”现象)。
连接基团:通常通过酰胺键(Rhodamine B羧基与谷氨酰胺氨基缩合)或酯键偶联,确保标记物在生理条件下稳定释放荧光信号。
2. 合成路径与反应条件优化
偶联策略
经典方法:Rhodamine B的羧酸基团在EDC/NHS催化下与L-Glutamine的氨基形成酰胺键,反应在弱碱性(pH 8.0-9.0)、无水DMF/DMSO中25-40℃进行,避免高温导致染料降解或肽键水解。
点击化学扩展:通过铜催化炔基-叠氮环加成(CuAAC)引入生物正交基团,实现多模态标记(如荧光+生物素)或靶向修饰(如抗体偶联)。
保护基策略:谷氨酰胺的侧链羧基需用Boc保护,防止副反应;反应后通过TFA脱保护,释放活性位点。
3. 纯化与表征关键步骤
纯化方法
色谱分离:C18反相HPLC(乙腈-水梯度洗脱,含0.1% TFA)去除未反应染料及小分子杂质,纯度≥95%;凝胶过滤色谱(Sephadex G-50)分离大分子产物。
透析/超滤:截留分子量3.5 kDa透析袋去除催化剂及盐分;超滤浓缩(10 kDa截留)提升产物浓度。
结构验证
质谱(MS):高分辨质谱验证分子量(如Rhodamine B-C5H10N2O3理论分子量约600-700 Da),误差<5 ppm。
核磁共振(NMR):¹H NMR检测染料芳香氢(δ 6.5-8.0 ppm)、谷氨酰胺α-氢(δ 3.5-4.5 ppm)及连接基团信号;¹³C NMR分析羰基碳与醚键碳。
荧光光谱:验证激发/发射波长与量子产率,确保荧光性能符合生物成像需求。

关于我们:
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