Streptavidin,Cy3 conjugate， 链霉亲和素-Cy3偶联物的制备方法

链霉亲和素-Cy3偶联物（Streptavidin, Cy3 Conjugate）是一种由链霉亲和素（Streptavidin）与荧光染料Cy3通过化学方法偶联形成的复合物。Cy3是一种广泛用于生物学研究的有机荧光染料，具有橙红色的发射光谱。链霉亲和素是与生物素结合能力极强的蛋白质，广泛应用于生物标记、免疫检测和分子探针研究。通过将Cy3与链霉亲和素结合，产生的复合物具有高特异性、灵敏度以及可视化功能，广泛应用于荧光成像、免疫分析、分子探针等领域。

制备方法

制备链霉亲和素-Cy3偶联物的基本步骤包括链霉亲和素与Cy3染料的化学偶联反应。以下是一般的制备流程，具体条件和步骤可能会根据实验需求和所使用的试剂有所不同。

1. 材料准备

• 链霉亲和素（Streptavidin）：选择商业化的链霉亲和素，通常是从Streptomyces avidinii中提纯的四聚体蛋白。应选择未经过任何修饰的链霉亲和素，以确保其与生物素的结合能力不受影响。

• Cy3荧光染料：Cy3（或Cy3.5）是一种常用的荧光染料，具有激发光波长约为550 nm，发射波长约为570 nm。Cy3通常以NHS（N-Hydroxysuccinimide）酯形式提供，方便与链霉亲和素上的氨基反应。

• 缓冲液：PBS缓冲液（磷酸盐缓冲盐水）用于稀释链霉亲和素及Cy3染料。通常使用pH值为7.4的PBS。

• 2. Cy3染料活化

Cy3染料以NHS酯（N-Hydroxysuccinimide ester）形式存在，这种酯化形式能与链霉亲和素表面暴露的氨基（-NH2）发生亲核反应，形成共价偶联。首先，需要将Cy3染料在适当的溶剂（如DMSO或水）中溶解并稀释至所需浓度。使用PBS缓冲液将Cy3染料进行活化，通常在0-4°C下进行反应，以避免过快的反应速率。

3. 链霉亲和素的预处理

在偶联反应前，链霉亲和素需要经过适当的预处理。通常使用PBS或其他适当的缓冲液（如HEPES缓冲液）对链霉亲和素进行稀释，以确保其在反应过程中的稳定性和活性。如果链霉亲和素中含有杂质或未完全溶解的蛋白，可以进行透析或离心过滤去除不溶性物质。

4. 链霉亲和素与Cy3偶联反应

将Cy3染料的NHS酯加入到链霉亲和素溶液中，按照一定的摩尔比进行反应。通常，Cy3染料与链霉亲和素的摩尔比为1:1或根据实验需求调整。反应通常在4°C下进行，并且反应时间可以设置为1-2小时，以确保充分偶联。反应过程中，Cy3的NHS酯部分会与链霉亲和素表面氨基（如赖氨酸残基上的氨基）发生反应，形成稳定的共价结合。

5. 去除未反应的Cy3染料

反应完成后，使用透析或凝胶过滤的方法去除未反应的Cy3染料和其他小分子杂质。透析使用适合大小的膜（如分子量切割为10-30 kDa的透析膜），通常透析过程会持续几个小时，直到溶液中不再有未结合的Cy3染料。如果使用凝胶过滤柱，可以使用常规的凝胶过滤介质（如Sephadex G-25），通过洗脱来去除不需要的分子。

6. 确认偶联物的纯度与效率

通过紫外-可见光谱（UV-Vis）或荧光光谱法确认链霉亲和素-Cy3偶联物的浓度和纯度。Cy3的吸收峰大约在550 nm处，发射峰则出现在570 nm附近。可以通过测量偶联产物的吸光度和荧光强度来评估偶联效率。如果使用SDS-PAGE凝胶分析，也可以评估链霉亲和素的分子量变化，确认偶联反应是否成功。

产品名称：链霉亲和素-Cy3偶联物

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

推荐产品：

CF 543 Tyramide Conjugates

CF 543 Tyramide Conjugates

Cal-670-Dextran Conjugate

Cal-630-Dextran Conjugate *MW 10,000

Cal-520-Biocytin Conjugate，

仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.09