链霉亲和素-AF680偶联物，Streptavidin, AF680 Conjugate，应用于分子标记

链霉亲和素-AF680偶联物（Streptavidin, AF680 Conjugate）是一种将链霉亲和素（Streptavidin）与荧光染料AF680（Alexa Fluor 680）通过化学偶联反应结合形成的复合物。AF680是一种近红外荧光染料，具有较长的激发波长（约680 nm）和发射波长（约700 nm），非常适合用于多重标记、深部组织成像、小动物体内成像等生物医学领域。链霉亲和素-AF680复合物利用了链霉亲和素与生物素之间的强亲和力和AF680染料的荧光特性，广泛应用于分子标记、流式细胞术、免疫检测、荧光成像等实验。

合成步骤

合成链霉亲和素-AF680偶联物的过程包括将链霉亲和素与AF680荧光染料通过化学反应偶联在一起。以下是常用的合成步骤。

1. 链霉亲和素的准备

• **链霉亲和素（Streptavidin）**是从Streptomyces avidinii菌株中提纯的四聚体蛋白，具有极强的与生物素结合的能力。链霉亲和素的分子量大约为60 kDa，每个分子能够与一个生物素分子特异性结合。在合成之前，链霉亲和素通常需要在适当的缓冲液中（如PBS或HEPES缓冲液）进行溶解，并调节至合适的浓度（通常为1-10 mg/mL）。应注意保证链霉亲和素溶液的pH值在7.4左右。

• 2. AF680荧光染料的准备与活化

AF680染料一般以NHS（N-Hydroxysuccinimide）酯形式提供，带有活性酯基团，这使得它可以与链霉亲和素上的氨基基团（如赖氨酸残基上的氨基）反应，形成共价键。因此，首先需要将AF680染料溶解在适合的溶剂中（如DMSO或水），通常溶解浓度为1-5 mg/mL。接着，AF680染料溶液需要在冰上保存，避免染料降解。

注意：AF680染料的NHS酯基团非常敏感，因此溶解后的染料溶液应立即用于偶联反应，避免长时间暴露在光照或高温环境中。

3. 偶联反应的进行

在此步骤中，链霉亲和素与AF680染料的反应将在4°C的低温下进行，以减缓反应速率，确保反应的选择性和高效性。首先，将AF680染料加入到链霉亲和素溶液中，确保二者的摩尔比适当，通常为1:1或略微过量的染料（例如1.5倍量）。AF680染料中的NHS酯基团与链霉亲和素表面的氨基（如赖氨酸的氨基）发生亲核反应，形成稳定的共价键。

反应时间通常为1-2小时。此过程中，链霉亲和素的每个分子可能与一个或多个AF680染料分子结合，从而增强复合物的荧光信号。反应过程中保持在低温下，以避免链霉亲和素的变性和染料的降解。

4. 去除未反应的染料

反应结束后，未反应的AF680染料和小分子杂质需要通过透析或凝胶过滤去除。常见的方法是使用透析袋（如分子量切割为10-30 kDa的透析袋）将偶联反应体系与未反应的染料分开，透析过程通常需要持续几小时，直到溶液中不再含有游离的染料。另一种方法是使用凝胶过滤柱（如Sephadex G-25），通过洗脱步骤去除多余的未反应染料。

为确保去除杂质，可以通过紫外-可见光谱（UV-Vis）或荧光光谱分析溶液，以确认染料的纯度和偶联物的荧光特性。

名称：链霉亲和素-AF680偶联物

储藏条件：-20°C干燥避光保存

厂家：齐岳生物

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