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Thiols-PEG（2k）-Biotin，巯基聚乙二醇生物素的合成工艺优化

发布时间：2026-01-19 作者：wyh 分享到：

产品名称：Thiols-PEG（2k）-Biotin，巯基聚乙二醇生物素的合成工艺优化

一、合成工艺优化

1. 巯基与生物素偶联路径

直接偶联：生物素-NHS酯与PEG-SH在PBS（pH 7.4）中室温反应2-4小时，通过酰胺键连接，催化剂可选EDC/NHS或DMAP。

点击化学策略：若PEG链含炔基/叠氮基团，可通过CuAAC/SPAAC与生物素-叠氮/炔基衍生物反应，提升反应效率（≥90%）。

保护基策略：巯基可先用乙酰基保护，合成后TFA脱保护，避免氧化或非特异性反应。

2. 关键参数控制

温度：室温至40℃，避免高温引发PEG链断裂或生物素降解。

pH/溶剂：弱碱性（7.5-8.5）促进酰胺化，中性条件稳定巯基；溶剂选用DMF、DMSO或PBS，氮气保护防氧化。

催化剂：DIEA提升反应效率，减少副反应；CuAAC需控制Cu²⁺浓度（≤1mM）避免细胞毒性。

二、反应活性验证关键实验

1. 巯基反应活性

与金纳米颗粒：紫外-可见光谱监测表面等离子共振峰位移（目标：红移≥10nm），TEM验证颗粒均匀性。

与马来酰亚胺：HPLC/质谱监测偶联效率（≥85%），Ellman试剂检测游离巯基含量变化（目标：减少≥90%）。

二硫键形成：与碘乙酰胺反应，SDS-PAGE验证二硫键生成，Western blot确认蛋白标记效率。

2. 生物素-链霉亲和素结合活性

结合实验：与Streptavidin-HRP孵育，ELISA/SPR检测Kd≤10⁻⁹ M；竞争性实验验证特异性（IC₅₀≤1μM）。

荧光标记验证：与荧光标记的链霉亲和素结合，共聚焦显微镜观察荧光信号强度及特异性（目标：信噪比≥10:1）。

3. 稳定性评估

热稳定性：40℃/75% RH加速老化30天，HPLC监测纯度变化（下降≤5%）；DSC验证玻璃化转变温度。

光稳定性：紫外照射（365nm，10mW/cm²）下荧光/吸光度变化≤15%（24小时）。

化学稳定性：强酸（1M HCl）、强碱（1M NaOH）、氧化剂（30% H₂O₂）中孵育24小时，质谱验证分子量稳定性。

Thiols-PEG（2k）-Biotin，巯基聚乙二醇生物素

关于我们：

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