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AF532 四聚乙二醇生物素偶联物，AF532 PEG4 biotin conjugate的操作步骤与实验流程

发布时间：2026-01-26 作者：wyh 分享到：

产品名称：AF532 四聚乙二醇生物素偶联物，AF532 PEG4 biotin conjugate的操作步骤与实验流程

一、溶解与溶液配制

溶剂选择：可直接溶于无菌水、PBS（pH 7.0-7.4）或含少量DMSO（≤5% v/v）的缓冲液。PEG4链提升水溶性，避免传统生物素-荧光素类试剂的溶解性问题。

工作浓度：通常为0.1-1μM（细胞实验）或0.5-10μg/mL（免疫分析），需根据实验目的（如标记效率、信号强度）梯度优化。

二、操作步骤与实验流程

标记反应

生物素化分子结合：与生物素化抗体、核酸或蛋白孵育，利用生物素与链霉亲和素（KD≈10⁻¹⁵ M）的高亲和力实现亲和捕获。反应条件：室温或4℃避光孵育10-30分钟，避免高温导致荧光淬灭。

双功能应用：可一步完成“生物素化+荧光标记”，减少操作步骤。例如，标记细胞表面糖蛋白时，先与生物素化ConA或WGA结合，再通过链霉亲和素-酶复合物放大信号（如ELISA）。

洗涤与纯化

去除未反应试剂：用PBS或含0.1% Tween-20的缓冲液洗涤3次，每次2-3分钟。复杂样本（如血清）可通过透析或离心超滤（30kDa分子量截留）进一步纯化。

降低非特异性吸附：加入0.1% BSA或10%血清，减少容器表面或样本中的非特异性结合。

检测与分析

荧光成像：使用488nm激光激发，519-520nm发射光（绿光通道），适配共聚焦显微镜、流式细胞术或多色标记实验。

定量分析：流式细胞术可定量细胞群体糖基化状态；荧光分光光度计测量荧光强度，结合标准曲线实现定量检测。

多场景应用：细胞膜/内质网标记、蛋白质相互作用研究、生物芯片扫描、活细胞动态追踪（如药物代谢）及免疫组化（如Western blot）。

三、应用场景与功能优势

生物分子纯化：标记目标分子后，通过亲和素树脂富集，AF532荧光信号监测纯化效率与洗脱峰位置。

免疫分析：作为荧光-生物素二抗，与一抗结合后，既可荧光成像，又可通过链霉亲和素-酶复合物进行信号放大（如ELISA）。

细胞成像与分选：标记生物素化细胞表面分子（如受体），AF532信号示踪定位，链霉亲和素-磁珠实现“成像+分选”联用。

特殊设计优势：PEG4链的柔性与亲水性减少空间位阻，避免荧光淬灭；生物素与荧光团分离设计确保结合后信号稳定。

AF532 四聚乙二醇生物素偶联物，AF532 PEG4 biotin conjugate

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