西安齐岳生物可提供活性酯功能化PEG-多肽偶联定制合成，支持NHS-PEG、SC-PEG等活性酯PEG与含氨基多肽进行定向偶联。可根据项目需求定制PEG分子量、单双端结构、多肽序列、连接位点及投料比例，并提供不同mg级规格。产物可采用HPLC纯化，并配置MS、HPLC等检测，支持冻干粉或溶液形式交付，满足科研用PEG化多肽材料的个性化制备需求。

1. 活性酯PEG-多肽偶联定制简介

核心价值：通过化学偶联技术，将活性酯（如NHS酯、SC、SPA）功能化的聚乙二醇（PEG）链，定点连接到目标多肽的特定氨基酸残基上。

应用场景：主要用于多肽药物长效化（延长半衰期）、靶向递送系统（构建PDC，即多肽偶联药物）、生物标记与探针（连接荧光染料或螯合剂）以及蛋白-多肽交联。

齐岳：提供从序列设计、合成、偶联到纯化分析的一站式服务。

2. PEG分子量、结构及功能基团定制

分子量范围：可定制 200 Da ~ 40 KDa 的PEG链。针对药物修饰，主流需求集中在 2K、3.4K、5K、10K、20K。

结构选择：

直链PEG：最常用，空间位阻小，偶联效率高。

支链/Y型PEG：相同分子量下遮蔽效果更好，有效延长体内循环时间。

活性酯功能基团（关键）：

NHS酯（SC/SPA/SG/SS）：最通用，与伯胺（-NH₂）反应，形成稳定的酰胺键。

Mal（马来酰亚胺）：若您要求巯基定点偶联，则推荐PEG-Mal，而非活性酯路线。

温馨提示：我们提供单一分子量（单分散）PEG 和 常规多分散PEG 两种规格，前者HPLC峰型更尖锐，适合申报定性。

3. 多肽序列与偶联位点设计

序列可行性评估：对提供的序列进行疏水性、等电点及潜在副反应位点（如多个Lys、Cys）评估。

位点设计原则：

长效化修饰：建议将PEG连接在远离活性口袋的C端，或通过柔性接头（如Ahx，即6-氨基己酸）引出。

靶向修饰：若多肽为靶头（如RGD（精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸）、CPP（细胞穿透肽）），偶联位点需确保不破坏其二级结构（如环肽的环化位点不能动）。

特殊技术支持：对于序列中无合适氨基的肽段，可引入非天然氨基酸（如叠氮赖氨酸）以配合后续点击化学，实现间接PEG化。

4. 活性酯PEG-多肽偶联路线设计

合成策略：采用 “先合成多肽，后液相偶联” 的经典路线（避免TFA切割时破坏PEG酯键）。

反应体系：

溶剂：无水DMSO（二甲基亚砜）或DMF（N,N-二甲基甲酰胺）。

催化剂：DIPEA（N,N-二异丙基乙胺）作为质子海绵，维持pH 7.5~8.5。

投料比：多肽 : 活性酯-PEG = 1 : 1.5 ~ 2.5（根据多肽珍贵程度调整）。

反应监控：全程采用 LC-MS（液相色谱-质谱联用） 实时追踪原料消耗，一旦转化率达到预期（>80%），立即终止反应（加少量水淬灭NHS酯），防止过修饰。

5. N端/Lys侧链/指定位置PEG化策略

N端氨基选择性修饰：

利用N端pKa（约7.6~8.0）低于Lys侧链ε-氨基（pKa约10.5）的特性，在 **pH 6.5~7.0** 弱酸性条件下，活性酯更倾向于进攻N端。此方法可得到N端单修饰产物（收率约60%~70%）。

赖氨酸（Lys）侧链定点修饰：

若多肽含有多个Lys，需采用正交保护策略：在固相合成时，用 Dde（1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代环亚己基)乙基） 或 Mtt（4-甲基三苯甲基） 保护非目标Lys，偶联完成后再用2%水合肼或1% TFA脱除。

指定位置（如Cys或引入的叠氮基）：

对于无氨基或希望获得均一产物的需求，推荐在序列中定点引入Cys，然后采用 PEG-Mal 与巯基的Michael加成，速率快且选择性100%（需防止二硫键形成）。

6. 反应后纯化与游离PEG去除

核心难题：未反应的游离PEG（不含紫外吸收）与PEG化产物极性接近，是最难去除的杂质。

分级纯化方案：

第一步（粗纯）：采用 离子交换层析（IEX） 或 分子排阻色谱（SEC/G25），粗略去除大部分未偶联PEG。

第二步（精纯）：使用 制备型HPLC，固定相首选 C4 或 C8 反相柱（避免使用C18，防止死吸附），流动相体系为 0.05% TFA/水 - 0.05% TFA/乙腈，梯度放缓至 0.5%/min 以分离多修饰副产物。

游离PEG检验标准：最终产物需通过HPLC检测，确保在PEG出峰位置（通常无UV吸收，靠ELSD（蒸发光散射检测器）或示差折光检测）无残留信号。

7. HPLC、MS等质量检测配置

纯度检测（HPLC）：配备 DAD（二极管阵列检测器）（监测220nm多肽特征峰）和 ELSD（监测PEG链）双检测器串联，确保纯度>95%（定制标准）。

结构确证（MS）：

分子量 < 6K：使用 MALDI-TOF（基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱） 或 ESI-MS（电喷雾电离质谱），确认分子离子峰与理论计算值一致。

分子量 > 6K：使用 MALDI-TOF 配合合适基质（如芥子酸），观察宽峰位移。

其他质控：内毒素检测（凝胶法或动态显色法，标准<5 EU/mg）、残余溶剂（TFA/乙腈）GC（气相色谱）检测。

8. 荧光、点击化学、靶向等进一步功能化

基于本偶联产物的下游拓展：

荧光标记：在PEG的另一端预修饰 FITC（异硫氰酸荧光素）/Cy5（花菁染料5），得到 PEG-多肽-荧光探针，用于细胞摄取或活体成像。

点击化学（Click Chemistry）：通过活性酯将 DBCO（二苯并环辛炔） 或 叠氮 引入多肽，用于后续与纳米载体或抗体进行无铜催化连接。

靶向-药物偶联（PDC前体）：偶联产物末端若保留羧基，可继续与 小分子毒素（如MMAE（单甲基奥瑞他汀E）、SN38（7-乙基-10-羟基喜树碱）） 缩合，形成完整的PDC分子。

9. 质量规格、产品状态及交付形式

产品状态：白色至类白色冻干粉（或无菌冻干粉）。

交付规格：

科研级：纯度≥95%，提供HPLC/MS图谱，交付量为1mg ~ 100mg。

临床前级：纯度≥98%，提供全套质检报告（COA，即分析证书），交付量克级起。

包装：惰性气体（氩气）保护，棕色西林瓶，-20℃低温运输（短期可4℃）。

10. 典型定制案例

案例一（长效化）：GLP-1（胰高血糖素样肽-1）类似物（含Cys突变）与 20K PEG-Mal 偶联，纯化后纯度98.2%，体外活性保留率>85%。

案例二（靶向环肽）：含二硫键的 cRGD（环状精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸）环肽，在N端定点偶联 5K PEG-SC，并继续连接Cy5，用于近红外肿瘤成像，偶联收率72%。

11. 可定制相关产品推荐

单分散PEG衍生物库：mPEG-NHS（2K/5K/10K）、Mal-PEG-NHS（异官能团）。

多肽原料：各种序列的线性肽、环肽（酰胺环、二硫环）、脂肪酸修饰多肽。

组合物：多肽-PEG-磷脂（用于脂质体修饰）、多肽-PEG-金纳米颗粒偶联物。

12. 下单前客户需要提供的信息

为了精准报价并一次性合成成功，请务必提供：

多肽序列（单字母/三字母均可）及环化方式（如有）；

目标PEG分子量及结构（直链/支链，单分散/多分散）；

期望的偶联位点（N端、指定Lys或Cys）；

最终用途（体外细胞实验、动物注射或申报用，这决定了纯度与内毒素标准）；

期望交付量（毫克/克级别）及时间节点。