基因cDNA经多次亚克隆插入到真核表达载体，定制服务

基因 cDNA 经多次亚克隆插入到真核表达载体是一个复杂但精确的过程，对于基因功能在真核细胞环境中的研究至关重要。

首先，获取**的基因 cDNA。这可能通过从特定组织或细胞类型中提取总 RNA，然后利用反转录酶进行反转录得到。在这个过程中，要保证 RNA 的完整性和纯度，避免 RNA 酶的污染。例如，可以使用 TRIzol 试剂提取 RNA，并在无 RNA 酶的环境下进行反转录操作，使用合适的引物（如 Oligo (dT) 引物或基因特异性引物）来确保准确合成 cDNA。

在进行多次亚克隆时，第一次亚克隆通常选择一个中间载体。这个中间载体要便于操作，具有合适的限制酶切位点。对基因 cDNA 和中间载体进行酶切，选择的限制酶要根据 cDNA 两端的序列和中间载体的多克隆位点来确定。例如，如果 cDNA 一端有 BamHI 位点，另一端有 XhoI 位点，而中间载体有对应的位点，就使用这两种酶进行双酶切。酶切反应在适宜的缓冲液和温度条件下进行，之后通过 DNA 连接酶将 cDNA 与中间载体连接，形成第一次亚克隆产物。

然后，对第一次亚克隆产物进行筛选和鉴定。可以通过在含有相应抗生素（如果中间载体带有抗生素抗性基因）的培养基上培养转化后的细菌，筛选出阳性菌落。再通过菌落 PCR、酶切鉴定等方法确认 cDNA 是否正确插入中间载体。

接下来进行后续的亚克隆步骤，将含有 cDNA 的中间载体和真核表达载体再次进行酶切和连接。真核表达载体应具备在真核细胞中有效表达基因的元件，如强启动子（如 SV40 启动子）、增强子、合适的 poly (A) 信号等。在每一次的酶切和连接操作中，都要严格控制反应条件。

齐岳生物生物自主开发的 CRISPR 细胞基因编辑系统，显著提高基因敲入细胞株构建过程中的高同源重组效率，并降低随机插入风险。

产品：

HeLa细胞系敲除NSUN2基因

HeLa细胞系敲除STING1基因

Hep G2细胞敲除PPP1R12B/KCNJ12/FGA基因

Hep G2细胞敲除SNORD17基因

HiBiT定点敲入

Hsp90-pTCY过表达质粒

用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

保存：冷藏

厂家：西安齐岳生物

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。