基因定点突变技术的实验方案，CRISPR/Cas9技术

定点突变是一种高度通用的技术，主要通过定制的方式引入特定的核苷酸突变，该技术广泛应用在常规克隆 (引入或去除限制性位点)、调控元件图谱 (使报告构建体中的启动子/增强子突变)、蛋白功能分析 (进行丙氨酸扫描诱变或关键残基的靶向替换)，以及SNP分析 (在质粒上引入自然发生的SNP)；另外在CRISPR领域也具有高度相关性，通常通过CRISPR/Cas9诱导的双链断裂的同源定向修复 (HDR) 将定制突变引入内源DNA。这种定点基因组编辑需要与内源靶点高度同源的模板，但为了便于修复，模板则不能被Cas9切割。如果质粒含有可引发定点突变的PAM序列的模板区段，那么Cas9对质粒的切割位点会更精准。

简而言之，定点突变可以在扩增整个质粒模板的PCR方案中使用引物 (具有所需突变位点) 将点突变引入质粒。使用甲基化依赖性核酸内切酶 (即DpnI) 去除模板质粒，并用点突变试剂盒将目标片段环化成质粒并进行转化，从所得单菌落中提取质粒，并进行测序以确认所需的突变，以及质粒中是否有其他突变产生。

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

齐岳生物提供的基因定点突变技术服务

基因的体外定点突变

寡核苷酸诱导的定点突变

诱导STGC3基因定点突变

利用CRISPR/Cas9系统对基因定点突变

蛋白基因定点突变

甲酸脱氢酶基因的定点突变

谷氨酰胺转胺酶基因的定点突变

PCR介导的定点突变

抗菌肽Protegrin基因的定点诱变

诱导基因组DNA碱基变异

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除