基因敲低、敲除、过表达载体的构建

敲除（敲低）目的基因。使用 RNA 干扰（RNAi）、CRISPR/Cas9、T-DNA 插入等方法敲除（敲低）目的基因，同时观察表型和功能变化。

过表达目的基因。选择目的基因构建过表达载体，将过表达载体导入细胞中，检测目的基因的表达情况，并观察表型、功能的变化。

一、基因敲除

是指通过基因编辑技术永久性地删除或失活一个基因的功能。常用于研究特定基因的功能，了解基因在生物体发育、生理过程和疾病中的作用。

方法：

1、同源重组：最早的方法之一，利用载体带有与目标基因两侧相同序列的DNA片段（同源臂），通过同源重组将目标基因的一部分或全部替换掉。

2、CRISPR/Cas9：利用CRISPR RNA（crRNA）和tracrRNA形成的复合体指导Cas9核酸酶在基因组的特定位置进行切割，通过非同源末端连接（NHEJ）机制引入随机插入或缺失，导致基因失活。

3、锌指核酸酶技术（ZFN）：设计锌指蛋白与特定基因组基因座结合，然后与FokI核酸酶融合，识别两个相邻位点的配对ZFN切割DNA。

4、转录激活因子样效应物核酸酶技术（TALEN）：利用转录激活因子样效应物与核酸酶融合，能在基因组中特定位点创建双链断裂，还可实现基因靶向修饰。

二、基因敲低

基因敲低是指通过降低基因的表达水平来研究基因的功能。当完全敲除基因可能会导致胚胎致死或其他严重后果时，可以通过敲低来研究基因的部分功能。

方法：

1、RNA干扰（RNAi）：通过引入与目标mRNA互补的小干扰RNA（siRNA）或微小RNA（miRNA），特异性地降解目标mRNA，从而降低蛋白质的合成。

2、CRISPR/Cas9：利用失活的Cas9（dCas9）与sgRNA结合，dCas9不切割DNA，而是结合到目标基因的启动子区域，阻止RNA聚合酶的结合，从而抑制基因的转录。

三、Crispr/Cas9操作步骤

由于Crispr/Cas9系统应用最为广泛，可以实现基因编辑，完成基因的敲除/敲入，还可以进行基因表达调控和剪辑替换。

定制服务：

Mouse CRISPRi Library

特定通路CRISPR基因敲除文库

DNA Damage Response Genes MKOv4 Library

Human Epigenetic Genes KO Library

Human Ubiquitination-related Genes KO Library

全基因组CRISPR基因敲除文库

全基因组范围的CRISPR敲除(GeCKO V2基因编辑文库)

CRISPR/Cas9协同转录激活调节子（SAM）

构建下调基因（shRNA）

“敲除”相关哺乳动物基因

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除