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shRNA质粒介导的RNA干扰通路示意图
发布时间:2024-12-16     作者:axc   分享到:

shRNA质粒介导的RNA干扰通路示意图

shRNA 为以质粒形式的存在的RNAi类别,其通常含有一段目的基因的靶序列以及把该靶序列的正义和反义链连接起来的loop环。常用的启动子有U6和H1。

shRNA质粒介导的RNA干扰通路示意图

优点:shRNA具有所有质粒都有的特点,可以人为的添加GFP等筛选标签,便于实验中观察细胞的转染效率,如果转染效率达不到要求还可以选择对应的真核抗生素进行筛选。有很小的概率可以整合基因组形成稳定的表达。作用时间比siRNA时间更长一些。


缺点:由于shRNA是以质粒的形式存在,不能用于感染原代细胞等难以转染的细胞。


shRNA质粒介导的RNA干扰通路示意图

shRNA介导的RNA干扰通路示意图. shRNA表达载体进入细胞质后,需要进入细胞核进行转录。初级转录本(pre-shRNA)遵循与microRNA初级转录本相似的路径。初级转录本经Drosha/DGCR8复合物处理形成pre-shRNA,通过exportin5蛋白运输到细胞质中,装载到Dicer/TRBP/PACT复合物中,进一步加工为成熟的shRNA。之后在Argonaute蛋白的作用下去掉发卡结构,产生成熟的siRNA,通过mRNA切割和降解或者通过p- body抑制翻译来发挥RNA干扰功能。shRNA慢病毒的作用机制基本相似,只是会整合到基因组。


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