FITC-D-Lys在细胞成像中如何使用？

一、样品制备与标记流程

探针溶解与浓度控制‌

溶解试剂‌：推荐使用无血清培养基或 PBS（pH 7.4）溶解 FITC-D-Lys，浓度范围为 ‌5-20 μM‌（根据细胞类型调整）。

DMSO 辅助溶解‌：若溶解困难，可先用 DMSO 溶解（终浓度 ≤1%），避免影响细胞活性。

细胞孵育与标记‌

孵育条件‌：将细胞与 FITC-D-Lys 孵育（37℃，5% CO₂），时间通常为 ‌30 分钟至 2 小时‌，具体需优化以平衡穿透效率与背景信号。

洗涤步骤‌：孵育后，用预冷的 PBS 洗涤 3 次，去除未结合的探针。

二、成像参数与设备设置

荧光显微镜参数‌

激发波长‌：488 nm（常用激光或汞灯激发）。

发射波长‌：520-535 nm（绿色荧光通道）。

曝光时间‌：控制在 100-500 ms，避免光漂白。

共定位分析（可选）‌

与其他细胞器染料（如 LysoTracker Red 标记溶酶体）共染色，验证 FITC-D-Lys 的细胞内定位。

使用共聚焦显微镜 Z-stack 扫描获取三维成像数据。

三、应用场景与实验优化

应用方向‌ ‌实验策略‌

受体介导的细胞摄取‌ 通过 LAT1 转运体（如肿瘤细胞、血脑屏障内皮细胞）研究 D-赖氨酸的主动转运机制。

代谢动态追踪‌ 延时成像记录 FITC-D-Lys 在胞内的分布变化，分析代谢动力学。

细菌细胞壁标记‌ 将 FITC-D-Lys 整合至革兰氏阳性菌（如金黄色葡萄球菌）的肽聚糖层，观察分裂位点。

四、注意事项与优化建议

背景信号控制‌

设置未标记细胞的空白对照，排除自体荧光干扰。

使用含 0.1% BSA 的洗涤液减少非特异性吸附。

活性验证‌

通过 CCK-8 或 Calcein-AM 法评估探针对细胞活性的影响。

避免过量标记（建议 FITC/D-Lys 摩尔比 ≤1:15），防止聚集导致荧光猝灭。

储存与稳定性‌

标记后的细胞样品需避光保存，建议成像前 24 小时内完成标记。

FITC-D-Lys 冻干粉长期保存于 -20℃，避免反复冻融。

典型实验结果示例

癌细胞成像‌：FITC-D-Lys 在 HeLa 细胞中呈点状分布，与溶酶体共定位（pH 敏感性验证）。

细菌追踪‌：标记后的金黄色葡萄球菌在分裂期显示环形荧光信号，辅助研究细胞壁合成机制。

通过上述方法，FITC-D-Lys 可作为高效工具研究细胞代谢、病原体感染及药物递送机制。