AF488-TSA,即 Alexa Fluor 488 Tyramide,是一种结合了荧光染料 Alexa Fluor 488 与酪胺(tyramide)的高灵敏度荧光标记试剂,用于 Tyramide Signal Amplification(TSA)系统。该试剂通过辣根过氧化物酶(HRP)催化反应,将 Alexa Fluor 488 荧光分子共价沉积于靶标位点,实现信号的放大。
Alexa Fluor 488 染料的特性
Alexa Fluor 488 是一种高性能的绿色荧光染料,其激发波长约为 495 nm,发射波长约为 519 nm,发射光呈明亮的绿色。相较于传统荧光染料(如 FITC),Alexa Fluor 488 具有以下优势:
高荧光量子产率:发光效率高,信号更强。
光稳定性:耐光漂白,适合长时间曝光和重复扫描。
水溶性良好:在多种缓冲液中均匀分散,不易沉淀或聚集。
光谱特性优越:激发与发射波段与 FITC 相近,可轻松替代,同时与其他染料有良好的光谱分离,适合多重染色。
AF488-TSA 的应用领域
免疫组织化学(IHC)
AF488-TSA 可在组织切片染色中检测低丰度蛋白,如转录因子、磷酸化蛋白、细胞因子等。尤其适合厚切片或信号较弱的样本。
原位杂交(ISH / FISH)
AF488-TSA 可大提高核酸检测的灵敏度,用于检测微量 RNA(如 miRNA、lncRNA)或 DNA 序列,增强信噪比,使靶标更易检测。
多重荧光染色
绿色荧光发射的 AF488 与 Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 647、Cy3、Cy5 等多种染料组合,可进行多重标记,确保信号清晰分离。
荧光显微成像
AF488-TSA 是共聚焦显微镜、超分辨率成像(如 STED、SIM)等高分辨率技术的重要工具,提供高亮度、低背景的成像效果。