文献：Extracellular Vesicle Crosslinkers Constructing Hydrogels with Stress-Relaxation and Bioactive Protein Modification

作者：Shi, Yanzhen Jing, Haowen Lu, Fanxuan Zhao, Mengying An, Shuiling Jin, Chang Gao, Yongdong Dai, Yinxin Zhu, Shuxu Yang, Songying Zhang, Xuesong Ye, Xiujun Cai, Yifan Wang

文献链接：https://advanced.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/admi.202400885

为了在EV表面引入官能团，将DSPE-PEG官能团（R）加入EV溶液（2-8%质量分数）中。在37°C下孵育30分钟或24小时后，获得了功能化的EV交联剂，称为EV-R。

在这项研究中，使用DSPE-PEG-SH、DSPE-PEG-马来酰亚胺、DSPE-PEG肼、DSPE-聚乙二醇叠氮化物和DSPE-PEG-FITC对EV进行官能化，分别得到EV-SH、EV-马来酰酰亚胺、EV-肼、EV-叠氮化物和EV-FITC。

通过流式细胞术使用EV-FITC证实了功能化的成功，并用动态光散射（DLS）分析了硫醇功能化前后粒径和ζ电位的变化。

通过将EV交联剂与相应的PEG基水凝胶大分子单体反应制备EV交联水凝胶。EV-SH、EV-马来酰亚胺、EV-肼和EV-叠氮化物分别与多臂PEG-Nb、PEG-SH、PEG-肼和PEG-二苯并环辛炔反应。

在EV-SH和PEG-Nb水凝胶中，前体溶液包括8臂PEG-Nb、EV-SH、苯基-2,4,6-三甲基苯甲基磷酸锂作为光引发剂（LAP，6 mM），以及Cys-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser（CGRGDS，1 mM，GL Biochem）作为细胞粘附配体。

硫烯比保持在1:0.6，所得水凝胶中EV的浓度保持在1.062×1010 EV mL-1，与PEG-Nb浓度无关。前体溶液在紫外光（15 mW cm-2，10 s，365 nm）下通过硫烯光化学交联。

为了调节这些水凝胶的性质，使用了PEG-Nb浓度（3-8wt.%）和DSPE-PEG-SH中PEG链段的分子量（2000或5000Da）。使用8臂PEG-SH作为对照交联剂，以相同的1:0.6硫烯比构建传统的弹性硫烯水凝胶。

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