文献：Ratiometric fluorescence imaging of cell surface pH by poly(ethylene glycol)-phospholipid conjugated with fluorescein isothiocyanate

作者：Ryuichi Ohgaki, Yuji Teramura, Daichi Hayashi, Lili Quan, Suguru Okuda, Shushi Nagamori, Madoka Takai & Yoshikatsu Kanai

文献链接：https://www.nature.com/articles/s41598-017-17459-y

摘要：

为了测试FITC-PEG脂质是否可以应用于细胞表面pH的定量成像，用FITC-PEG脂肪标记的KATO III细胞接受了比率共聚焦激光扫描显微镜。在分析过程中，通过手动更换外部缓冲溶液，将外部pH值从pH 7.5逐步调整到5.0。由于在当前设置下，弱荧光强度接近共聚焦激光扫描显微镜的检测下限，因此没有在酸性更强的pH值下进行测量。在458μm的激发波长下，在每种溶液中都获得了图像 nm和488 nm，荧光检测范围为500-550 nm.正如预期的那样，荧光比（488 nm/456 nm）是外部pH值所特有的，因此在伪彩色图像中用不同的颜色表示（图4a）。对于定量分析，在质膜上设置感兴趣区域（ROI）（如图4a，ROI所示），计算荧光比。荧光比与外部溶液pH值的关系图表明，通过非线性回归分析，FITC-PEG脂质荧光的比率读数很好地符合以下五参数S形方程（图4b）。

测量结果足够准确，可以区分0.1的差异 pH值为5.9、6.0和6.1的外部溶液的pH单位（图4c）。使用方程式（1）根据荧光比计算的局部细胞表面pH值与实际外部pH值（pH 5.903）一致 ± 0.034,pH值5.999 ± 0.025 pH值为6.100 ± 0.028; Mean ± SD, n = 30). 此外，细胞外pH值在6.5至6.0之间重复变化至少五次，对计算的pH值没有显著影响（图4d）。FITC-PEG脂质的这种可逆反应表明了其在跟踪连续pH波动方面的潜在应用。在延时分析中，细胞外pH值通过分级顶部灌注系统无缝变化，荧光比在6.5至5.5之间的细胞外pH范围内迅速可逆地发生变化。

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