FITC-CAQK(荧光素标记 CAQK 多肽)定制合成技术
1. 多肽与标记策略
CAQK(Cys-Ala-Gln-Lys)是一种针对中枢神经系统髓鞘脱髓鞘区域特异性聚集的小肽,可用于神经损伤靶向递送(例如,多发性硬化、脊髓损伤模型)。将 FITC(异硫氰酸荧光素)标记在 CAQK 的 N 端或侧链 Lys 上,可以实现同时具备靶向(CAQK 识别 ECM)与荧光追踪功能。
2. 合成技术流程
肽段合成:采用 Fmoc 固相肽合成(SPPS),顺序合成 Cys-Ala-Gln-Lys 的四肽,常用 Wang 树脂或 Rink 树脂作为载体;
Spacer 插入:为避免 FITC 标记后因位阻或酸促裂造成 N-端*后一氨基酸脱落,建议在末端 Lys 或 N-端插入间隔子(如 6-氨基己酸 Ahx);
FITC 偶联:将 FITC 在适当保护去除后溶于 DMF,并在 pH ~9.0–9.5 的弱碱条件下与脱保护的 N-端胺或 Lys ε-胺反应形成稳定的硫脲键;
脱树脂与纯化:反应完成后用 TFA 溶剂裂解肽链并除去保护基,随后通过 反相 HPLC(C18 柱)纯化;
质量分析验证:采用 MALDI-TOF 或 ESI-MS 确认分子量,HPLC 显示纯度 ≥95%;¹H-NMR 验证 FITC 化学结构合成是否正确。
3. 技术优化要点
FITC 偶联*好在固相肽合成完成后立即进行,避免 FITC 在酸性裂解中发生环化导致信号丧失;
Ahx 链或 β-Ala 等简短 spacer 作为缓冲减少空间干扰,提高耦合效率;
反应避免光照、氧化,建议避光在 4 °C 储存,干燥保存。
4. 表征与应用
荧光光谱测试:FITC 激发约 495 nm,发射约 519 nm;可用于荧光显微、流式分析等平台检测;
靶向验证:在髓鞘损伤模型中注入 FITC-CAQK,可观察其在病灶 ECM 中的积聚,验证 CAQK 的靶向特性;
稳定性实验:评估在血液、PBS 媒体中的荧光稳定性与分解情况;
剂量与荧光强度校准:通过标准曲线测量荧光强度与肽浓度关系。
产地:西安齐岳生物
用途:科研
包装:瓶装
关于我们:
西安齐岳生物科技有限公司专注于荧光材料,peg衍生物、磁珠微球、蛋白、多肽、氨基酸、小分子、生物素类试剂、PEG衍生物、共聚物及光电功能材料的定制合成服务。公司拥有成熟的有机合成、生物合成与分子修饰平台,提供从结构设计、工艺开发到纯化表征的一站式定制方案。
以上资料由齐岳生物小编zhn提供,仅用于科研
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