英文名称: AF647COOH
MF: C42H61N3O14S4
MW: 960.2
CAS: 407627-59-2
Alexa Fluor 647 COOH是一种高性能远红色荧光染料,广泛应用于分子生物学、细胞生物学、生物化学、免疫学以及活体和体外荧光成像研究。作为 Alexa Fluor 系列的一员,AF647 COOH 具有出色的光学性能、高亮度光稳定性和羧酸官能团的化学可操作性,可用于蛋白质、多肽、小分子及纳米材料的标记和功能化。远红色荧光特性使其在多通道荧光实验中可以与蓝色、绿色、橙红色荧光染料联合使用,实现复杂生物体系的多参数分析。
分子结构与化学特性
AF647 COOH 由 Alexa Fluor 647 荧光核心和羧酸官能团组成。Alexa Fluor 647 的激发峰约为 650 nm,发射峰约为 668 nm,具有高量子产率、亮度强和光稳定性优异的特点。羧酸官能团能够通过化学活化(如 EDC/NHS)与蛋白质、多肽或其他含氨基分子形成稳定的酰胺键,实现共价偶联。相比于直接的 NHS 酯或 Maleimide 衍生物,羧酸形式具有更好的化学稳定性,适合长期储存和缓冲液中的操作,为后续偶联和实验应用提供便利。
光学特性
AF647 COOH 属于远红色荧光染料,激发峰约 650 nm,发射峰约 668 nm。其亮度高、光漂白耐受性好、发射谱窄,非常适合多通道联合检测实验。远红色荧光在细胞及组织成像中自发荧光干扰较低,有利于提高信噪比。良好的水溶性确保染料在缓冲液和生物体系中均匀分布,从而提升标记效率和实验 reproducibility。
主要应用
蛋白质标记
AF647 COOH 可通过羧基活化与蛋白质赖氨酸残基或其他氨基官能团偶联,形成稳定的荧光标记蛋白。标记后的蛋白质可用于免疫荧光染色、Western blot、ELISA、免疫沉淀及流式细胞分析。远红色荧光信号清晰,适合低浓度蛋白的高灵敏检测。
抗体偶联
AF647 COOH 常用于抗体标记,可制备高质量的荧光免疫探针或二抗。通过羧酸活化生成 NHS 酯后与抗体偶联,标记后的抗体在免疫检测中提供高信噪比信号,并可与蓝色、绿色或橙红色荧光染料联合用于多通道检测。
多肽和小分子标记
AF647 COOH 可与含氨基的多肽或小分子偶联,制备功能性荧光探针。其高亮度、化学稳定性和可控偶联能力,使标记探针在分子识别、受体定位、酶活性检测及药物靶点研究中表现可靠且可重复。
活细胞及组织成像
AF647 COOH 标记的分子适用于活细胞和组织成像。远红色荧光可与蓝色、绿色或橙红色荧光染料联合使用,实现多通道多参数检测。其光稳定性保证长时间动态追踪实验的可靠性,适合蛋白质动力学、细胞器定位及分子分布研究。
分子相互作用研究
AF647 COOH 可用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-核酸或小分子相互作用研究。通过荧光强度变化或能量转移效应(如 FRET),可以定量分析分子间结合、动力学及空间分布,为分子机制研究提供可靠数据。
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