Phalloidin-CY5.5 定制合成技术
中文名称:鬼笔环肽-CY5.5
英文名称:Phalloidin-CY5.5
一、分子设计原理
Phalloidin(鬼笔环肽)是一种从毒鹅膏菌(Amanita phalloides)中分离出的七肽毒素,其核心特性是能够高亲和力、不可逆地结合F-肌动蛋白(F-actin),从而在细胞生物学中被广泛用作肌动蛋白细胞骨架的高特异性探针。为了实现荧光成像功能,Phalloidin常与荧光染料进行共价修饰,形成不同波段的荧光探针。
CY5.5是一种近红外荧光染料,发射波长约为694 nm,能够避免细胞和组织的自发荧光干扰,具有组织穿透力强、背景噪声低的优势。将CY5.5与Phalloidin偶联,可以在活体或固定细胞中对F-肌动蛋白网络进行深层成像,并在多重荧光实验中与其他可见光波段的荧光探针区分开来。
因此,Phalloidin-CY5.5的设计原理在于利用鬼笔环肽的高选择性结合能力和CY5.5的近红外成像特性,构建一种高灵敏度、高穿透力的细胞骨架荧光探针。
二、定制合成技术路线
Phalloidin的活性基团修饰
Phalloidin分子中天然氨基或羟基基团可作为修饰位点。
通过引入氨基或羧基活性基团,为后续与CY5.5的偶联提供反应位点。
荧光染料CY5.5的活化
常用CY5.5-NHS ester(琥珀酰亚胺酯)作为活化形式。
该活化酯能够与Phalloidin上的氨基发生高效酰胺键偶联,确保荧光基团稳定连接。
偶联反应
在缓冲液体系(pH 7.5–8.5)中,Phalloidin与CY5.5-NHS ester进行共价反应。
反应条件需控制温度(通常为室温),以保证结构稳定性。
纯化步骤
采用高效液相色谱(HPLC)分离目标产物与未反应的游离染料。
通过质谱与核磁共振分析确认产物结构。
冻干与保存
将纯化后的Phalloidin-CY5.5进行冻干,获得稳定粉末形式。
保存条件通常为-20℃避光,以保持荧光活性。
三、关键工艺要点
位点选择:Phalloidin的修饰位点必须避免影响其与F-肌动蛋白的结合活性。
偶联效率:CY5.5的活性酯在水溶液中极易水解,因此必须快速反应并优化摩尔比。
纯度控制:确保未结合的游离CY5.5完全去除,避免成像背景干扰。
稳定性验证:通过光稳定性与结合实验测试其在细胞固定及成像中的稳定性。
四、技术优势与性能
高特异性:Phalloidin分子确保对F-肌动蛋白的不可逆结合,荧光信号高度集中。
近红外成像优势:CY5.5的长波长发射减少组织自发荧光,信噪比高。
深层组织穿透:适用于活体动物成像及厚切片组织的深层观测。
定制化灵活性:可根据用户需求调整连接位点、荧光强度或修饰方式,实现多波段标记。
实验兼容性强:可与多种固定和透化方法兼容,适合免疫荧光染色及共聚焦显微镜成像。
产地:西安齐岳生物
用途:科研
以上资料由西安齐岳生物小编zhn提供,仅用于科研
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