Cy7.5-lactalbumin,CY7.5标记乳清蛋白的合成步骤概述
CY7.5-lactalbumin 是将乳清蛋白(α-Lactalbumin, 一种小型球状蛋白,分子量约 14 kDa)与近红外荧光染料 CY7.5 偶联形成的功能性蛋白分子。乳清蛋白富含赖氨酸、酪氨酸和半胱氨酸残基,具有良好的水溶性和生物相容性。CY7.5 偶联赋予其荧光标记功能,使其在体外或体内实验中可直接追踪。
合成步骤概述:
蛋白溶液制备
将纯化乳清蛋白溶解于适宜缓冲液(如 0.1 M 磷酸盐缓冲液,pH 7.4),浓度控制在 1–5 mg/mL。缓冲液应避免含有初级胺或巯基的组分,以免干扰偶联反应。溶液需充分溶解并保持蛋白折叠结构。
CY7.5 活化
CY7.5 荧光染料通常以 NHS 酯形式提供,可与蛋白赖氨酸 ε-氨基共价结合。若为羧酸形式,需要通过 NHS 或 DCC 等活化剂生成活性中间体(CY7.5-NHS ester),以便高效偶联。
偶联反应
在室温或轻微搅拌条件下,将活化 CY7.5 缓慢加入乳清蛋白溶液中,通常以摩尔比 1:1 到 1:5(蛋白:染料)控制标记程度。反应在 pH 7–8 的缓冲体系中进行 2–4 小时,使酰胺键充分形成,同时保留蛋白活性。
纯化与去除游离染料
反应结束后,通过透析、超滤或凝胶过滤色谱去除未偶联的 CY7.5。纯化后的产物应表现出稳定的荧光信号和蛋白溶解性。
表征
通过紫外-可见吸收光谱、荧光光谱及 SDS-PAGE 检测偶联成功。可测定标记度,并通过蛋白活性或构象分析验证乳清蛋白折叠和功能保持。
特点与应用:
CY7.5-lactalbumin 保留乳清蛋白的水溶性、构象和生物相容性,同时具备近红外荧光追踪功能,可用于 体外细胞实验、药物递送研究、蛋白动力学及成像实验。通过控制偶联度,可兼顾荧光强度与蛋白活性,为蛋白标记实验提供可靠工具。
产品名称:Cy7.5-lactalbumin,CY7.5标记乳清蛋白
纯度:95%+
性状:固体或液体
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
厂家:齐岳生物
关于我们
齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务,如活性酯(NHS酯)、马来酰亚胺(MAL)、叠氮(N₃)、炔基(alkyne)等,便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合,实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外,齐岳生物还提供定制染料标记服务,包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物,满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。
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仅供科研,不能用于人体实验AXC.2025.06.23